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ELISA試劑盒哪家可靠

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-18

ELISA試劑盒加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,悄悄晃動(dòng)混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用。洗刷:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗刷液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:除空白孔外每孔參加酶標(biāo)試劑50μl。溫育:操作。洗刷:操作同5。顯色:ELISA試劑盒每孔先參加顯色劑A50μl,再參加顯色劑B50μl,悄悄震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。停止:每孔加停止液50μl,停止反響(此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。ELISA試劑盒的標(biāo)本應(yīng)清澈透明,檢測(cè)前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過離心去除。ELISA試劑盒哪家可靠

ELISA試劑盒組成結(jié)構(gòu):血清:操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)有害物質(zhì)的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高的血脂血。珠海ELISA試劑盒品牌目前市面上的Elisa試劑盒檢測(cè)原理主要有以下四種:直接法,間接法,夾心法,競(jìng)爭(zhēng)法。

免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何優(yōu)越的診斷試劑離不開優(yōu)越的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。

先將抗原結(jié)合到ELISA板上,隨后分兩步進(jìn)行檢測(cè):首先加入檢測(cè)抗體與抗原特異性結(jié)合,隨后加入酶標(biāo)二抗檢測(cè)并利用底物顯色。與直接ELISA相比,間接ELISA用到酶標(biāo)二抗,具有更高的靈敏度,也需要更少的標(biāo)記抗體,更經(jīng)濟(jì)。間接ELISA還提供了更大的靈活性,因?yàn)椴煌囊豢鼓軌蚺c單一標(biāo)記的二抗一同使用。間接ELISA實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn)是存在交叉反應(yīng)的可能性(酶標(biāo)二抗直接與抗原結(jié)合),可能會(huì)增加背景,同時(shí)與直接ELISA相比,間接ELISA實(shí)驗(yàn)多了二抗孵育的步驟,實(shí)驗(yàn)周期延長(zhǎng)。ELISA試劑盒已普遍應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

Elisa生物檢測(cè)是一種敏感度高,同時(shí)特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法,由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。Elisa試劑盒評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,應(yīng)大于等于0.9900。靈敏度:反應(yīng)試劑盒的較低檢測(cè)濃度,特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù),回收率:判斷實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和特異性,目前市面上的Elisa試劑盒檢測(cè)原理主要有以下四種:直接法,間接法,夾心法,競(jìng)爭(zhēng)法。ELSIA 就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。ELISA試劑盒哪家可靠

ELISA試劑盒以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件。ELISA試劑盒哪家可靠

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。ELISA試劑盒哪家可靠

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