選取有表達性的蔬菜樣品,擦去表面泥土,剪成1cm左右見方碎片,取5g放入帶蓋瓶中,加入10ml純凈水或緩沖液,震搖50次,靜置2min以上。取一片農藥殘留快速檢測卡,撕去上蓋膜,用白色藥片沾取提液,放置10min以上進行預反應,有條件時,在37℃恒溫箱裝置中放置10min。預反應后的藥片表面必須保持濕潤。將農藥殘留快速檢測卡對折,用手捏3min或恒溫裝置中放置3min,使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應。根據白色藥片的顏色變化判讀結果。每批測定應設一個純凈水或緩沖液的空白對照卡。膠體金檢測卡樣本中的孔雀石綠與微孔中膠體金標記的特異性單克隆抗體結合。沈陽血糖膠體金檢測卡
膠體金法抗原檢測卡實際上主要是由一條吸水紙(成分為硝酸纖維素)構成,好比是一條馬路。這條路上有四個公交站點,一站是一個包含玻璃纖維的樣品孔(標記為S,即Sample),第二站是膠體金納米顆粒與抗體的結合物,它們通過靜電相互作用緊緊相連,并可以結合抗原,第三站是含有抗體的條帶(標記為T,即Test),這種抗體會與膠體金/抗體/抗原三元復合物形成四元夾心復合物,第四站是含有免疫球蛋白的條帶(標記為C,即Control),它可以與膠體金/抗體結合物產生相互作用形成復合物。南京農殘類膠體金檢測卡膠體金是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種免疫層析技術。
膠體金標記實質上是將蛋白質等高分子物質吸附到膠體金顆粒表面的過程。在溶液pH接近蛋白質的等電點或偏堿性條件下,金顆粒表面的負電荷與蛋白質表面帶正電荷的基團因靜電吸附而形成牢固結合,而且在吸附后不會使生物大分子變性。因此,橙汁、可樂、醋之類的酸性物質會干擾膠體金法檢測過程。膠體金可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、酶等非共價結合,當這些結合物在相應的蛋白配體處大量聚集時,用肉眼就可以看到紅色或粉紅色,因此膠體金是免疫分析中很好的標記物。
膠體金檢測常用檢測技術:免疫膠體金光鏡染色法:細胞懸液涂片或組織切片,可用膠體金標記的抗體進行染色,也可在膠體金標記的基礎上,以銀顯影液增強標記,使被還原的銀原子沉積于已標記的金顆粒表面,可明顯增強膠體金標記的敏感性。免疫膠體金電鏡染色法:可用膠體金標記的抗體或抗抗體與負染病毒樣本或組織超薄切片結合,然后進行負染??捎糜诓《拘螒B(tài)的觀察和病毒檢測。斑點免疫金滲濾法:應用微孔濾膜(如膜)作載體,先將抗原或抗體點于膜上,封閉后加待檢樣本,洗滌后用膠體金標記的抗體檢測相應的抗原或抗體。膠體金檢測卡為了食品安全,相關部門可以通過瘦肉精檢測卡來確定是否含有瘦肉精。
膠體金免疫層析法將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結合墊上,當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后,通過毛細作用向前移動,溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應,再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時,待檢物與金標試劑的結合物又與之發(fā)生特異性結合而被截留,聚集在檢測帶上,可通過肉眼觀察到顯色結果。該法現已發(fā)展成為診斷試紙條,使用十分方便。應用微孔濾膜(如膜)作載體,先將抗原或抗體點于膜上,封閉后加待檢樣本,洗滌后用膠體金標記的抗體檢測相應的抗原或抗體。農藥殘留在蔬菜瓜果之類的農產品中較為常見,農殘檢測是消費者熟知的一種食品安全檢測項目。長春布魯氏菌膠體金檢測卡
免疫膠體金技術并不是個新產物,從上世紀七十年代發(fā)展至今已經非常成熟。沈陽血糖膠體金檢測卡
膠體金檢測卡使用時將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20~25 °C)平衡30 min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板,將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封,保存于2~8°C。切勿冷凍。 洗滌液在使用前也需回溫。 將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。加標準品/樣本:加標準品/樣本50μL到對應的微孔中,再加入三聚氰胺酶標物50μL/孔,再加入三聚氰胺抗試劑50μL /孔輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置室溫25°C避光環(huán)境中反應30 min。沈陽血糖膠體金檢測卡
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