精確的方法當數(shù) ＤＮＡ 測

序技術(shù)，但存在耗時長、費用高等缺點的限制，無法應用于臨床

進行常規(guī) 檢 測?，F(xiàn) 常 用 方 法 仍 是 ＰＣＲ、ＲＦＬＰ、ＳＳＣＰ 等 技

術(shù)。在早期采用的方法是 ＰＣＲ 擴增之后直接電泳，比 較 電 泳

圖譜差異進行細菌種屬的鑒定；如果 ＰＣＲ產(chǎn)物單一，可以利用

ＲＦＬＰ得到不同的酶切片段加以分析或單鏈構(gòu)相多態(tài)性（ＳＳ－

ＣＰ）加以區(qū)分。而１６ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 基 因 間 區(qū) 與 某 些 基 因（如

ｍｅｃＡ 基因、ｏｍｐ２５和ｏｍｐ３１基因等）聯(lián)合進行細菌鑒定，與電

導技術(shù)相結(jié)合或與人工神經(jīng)網(wǎng)絡技術(shù)（ＡＮＮ）相結(jié)合進行細菌

鑒定等均可提高鑒定的靈敏度和特異度。 18S 多種測序供您選擇。全長16S測序服務

在真核微生物中，核糖體 DNA 是由核糖體基

因及與之相鄰的間隔區(qū)組成，其基因組序列從 5′到 3′依次為：外部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(external transcribed

spacer，ETS)、18S rRNA 基因、內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū) 1

(ITS1)、5.8S rRNA 基因、內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū) 2 (ITS2)、

28S rRNA 基因和基因間隔序列(intergenic spacer，

IGS) 。其中，18S rRNA 基因是編碼真核生物

核糖體小亞基的 DNA 序列，其中既有保守區(qū)，也

有可變區(qū)(V1?V9)。與 16S rRNA 基因相似，保守區(qū)

反映了生物物種間的親緣關(guān)系，而可變區(qū)則能體現(xiàn)

物種間的差異，適用于作為物種分類單元及系統(tǒng)發(fā)

育的分子標記。在中，相比于 rRNA 中的 18S、

5.8S 和 28S 的基因組序列，內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū) ITS1 和

ITS2 作為非編碼區(qū)具有更高的豐富度和分辨率，承

受的選擇壓力較小，相對變化較大，并且能夠提供

詳盡的系統(tǒng)學分析所需要的可遺傳性狀。 全長16S測序服務上海融享生物科技有限公司測序的16s 怎么樣？

rRNA 結(jié)構(gòu)既具保守性又具高變性。保守性反映生物物種的親緣關(guān)系, 高變性則揭示生物物種的特征核酸序列, 是屬種鑒定的分子基礎(chǔ)。 16S rRNA 基因大小適中, 約 1.5Kb 左右, 含有高 度保守的基因片段, 同時在不同的菌株間也含有 變異的核酸片段。因其既能體現(xiàn)不同菌屬之間的 差異, 又能利用測序技術(shù)快速得到核酸序列, 已成 為理想的基因鑒定靶序列。通過對其序列的分析, 可以判定不同菌屬、菌種間遺傳關(guān)系的遠近。細菌 的 16S rRNA 可變區(qū)位點結(jié)構(gòu)如下: 可變區(qū)序列 因不同細菌而異, 恒定區(qū)序列基本保守, 所以可以 利用恒定區(qū)序列設計引物將 16S rRN**段擴增 出來, 利用可變區(qū)序列的差異來對不同菌屬、菌種 的細菌進行分類鑒定。但較其它方法而言, 16S rRNA 序列測定分析更適用于確定屬及屬以上分 類單位的親緣關(guān)系。

P Kaufmann 等用 16S rRNA 探針雜交技術(shù) 和 PCR 技術(shù)定量鑒定了分離自食物中的 30 株雙 歧桿菌。1997 年, D Mora 等利用套式 PCR 方法擴 增 16S rRNA 序列和一段 D- 乳酸脫氫酶基因, 對 乳酸片球菌( Pediococcus acidilactici) 和戊糖片球 菌( Pediococcus pentosaceus) 進行了鑒定。后來, P Parola 等( 1998 年) 又利用 16S rRNA 基因序列 分析技術(shù)從敗血癥患者術(shù)后區(qū)域成功地分離 出干酪乳桿菌。1998 年, T Matsuki 等利用 16S rRNA 序列分析快速鑒定了人腸道中的 46 株雙 歧桿菌。1998 年, R Patel 等應用 16S rRNA 序列 分 析 將 一 株 雞 腸 球 菌 鑒 定 到 種 。1999 年 , GW Tannock 等利用 16S- 23S rRNA 間區(qū)序列的比較 分析分別對分離自胃腸道、青貯飼料和酸奶中的 40 株乳桿菌進行了鑒定。2000 年, MJ Kullen 等 利用細菌 16S rRNA 的包括可變區(qū) V1 和 V2 的 500bp 長度片段序列快速準確地從人腸道混合物 中鑒定出嗜酸乳桿菌。在 2000 年, 黃錫全等對一 株明串珠菌的 16S rRNA 基因序列進行分析, 并 與其它 21 株乳酸菌 16S rRNA 基因序列進行了 同 源 性 比 較 , 與 檸 檬 色 明 串 珠 菌 的 同 源 性 為 99%, 認為該菌株是一株檸檬色明串珠菌。上海融享生物科技有限公司主營測序包括16s價格優(yōu)惠。

PCR- RFLP 法是先擴增一基因或基因片段, 再用限制性內(nèi)切酶酶切擴增片段, 然后電泳分酶 切片段。PCR- RFL P 分析細菌的 16S rRNA 基 因, 可鑒定到種和亞種的水平。16S rRNA 基因的 擴增產(chǎn)物如用一種限制性內(nèi)切酶消化得到的圖譜 信息很少, 分辨率不高。因此, 對于某些菌種需要 兩種或三種不同的內(nèi)切酶方能作后續(xù)的鑒定。如 將該技術(shù)與 ARDRA( Amplified rDNA Restriction Analysis) 技術(shù)結(jié)合, 依據(jù)原核生物 rDNA 的保守 性, 將擴增的 rDNA 進行酶切, 然后通過酶切圖譜 來分析菌間的多樣性, 該法無需將試樣分純, 簡 便、高效, 是一種很有發(fā)展前途的方法。根據(jù)您的具體需求選擇不同的 18S ITS。全長16S測序服務

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2000 年, M Manzano 等利用溫度梯度凝膠電泳的方法 分析 16S rRNA 對分離自食物中的利斯特氏菌進行了鑒定。 2001 年, HJ Monstein 等利用溫度梯度凝膠 電泳和 PCR 擴增 16S rRNA 的 V6 區(qū) ( 可變區(qū)) 片段的方法對 16 株腸球菌進行了鑒定。2001 年, 沈永才等利用 16S rRNA 的 PCR 法鑒定了 8 株 雙歧桿菌, 并用 16S rRNA 熒光定量 PCR 法對雙 歧桿菌進行了定量檢測。2002 年, A Manero 等對 利用 16S rRNA 探針雜交的方法鑒定腸球菌屬細 菌進行綜述。2002 年, Y Woo- PatrickC 等通過 16S rRNA 序列分析的方法, 從一位菌血癥膽囊 炎患者體內(nèi)檢測到了唾液乳桿菌的存在。2003 年, Y Seto 等對 16S rRNA 序列特定長度片段進 行 分 析 , 對 人 體 糞 便 樣 品 中 嗜 酸 乳 桿 菌 ( Lactobacillus acidophilus) 的分布情況進行了檢 測。2003 年, JR Byun 等利用分析 16S rRNA 和 23S rRNA 間區(qū)序列的方法對一株鼠李糖乳桿菌 ( Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103) 進行了鑒 定, 并與干酪乳桿菌( L. casei) 、嗜酸乳桿菌( L. acidophilus) 和瑞氏乳桿菌( L. helveticus) 的 16S rRNA 和 23S rRNA 間區(qū)片段進行了比較。全長16S測序服務