—20℃）凍存——應(yīng)選較佳稀度凍存。③若工作濃度大于1∶500則要先將原液稀釋十倍，而后分裝10μl/瓶→凍存（-20℃）于冰箱備用。④關(guān)于Ab保存應(yīng)參照說明書。（3）Ab濃度的選擇Ab濃度不可太高或太低，因?yàn)锳g-Ab結(jié)合需在一定濃度范圍內(nèi)進(jìn)行，若一方過剩則形成復(fù)合物小且少；極過剩時(shí)已形成的復(fù)合物亦會(huì)解體而呈現(xiàn)假陰性。——并非Ab濃度越高越好。3．Ab滴片技術(shù)——所滴的抗體應(yīng)與切片上的組織剛好吻合。[注意]滴抗體前需把切片上的水弄干，但不能干片。要領(lǐng)：甩凈組織周圍的水。4．PBS洗滌技術(shù)（1）洗滌的目的①保證離子濃度和PH值。②減少非特異反應(yīng)（平時(shí)Ab不可靠很純）（2）方法：洗三次，每次5分鐘。5．Ab孵育技術(shù)（1）必須在濕盒內(nèi)進(jìn)行，以防抗體的蒸發(fā)和干片。（2）溫度與時(shí)間4℃：過夜；37℃：2hor參考說明書6．光鏡控制顯色方法（1）室內(nèi)操作：注意溫度與時(shí)間的關(guān)系，室溫較宜5分鐘。（2）染色稍淺亦可拿出，脫水，封片后顏色可加深。對(duì)照組和染色結(jié)果的評(píng)價(jià)從以下幾個(gè)方面綜合評(píng)價(jià)：1．陽性染色特點(diǎn)①Ag定位，胞漿、胞核、胞膜、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。（非特異性～細(xì)胞與組織無區(qū)別）②染色強(qiáng)度不同：顏色深淺不一。上海轉(zhuǎn)錄組技術(shù)比較好的公司找融享生物。天津動(dòng)物實(shí)驗(yàn)免疫組化服務(wù)機(jī)構(gòu)

被檢測(cè)的物質(zhì)

組織或細(xì)胞中凡是能作為抗原或半抗原，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。

6、特點(diǎn)

1）特異性強(qiáng)

免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

2）敏感性高

在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。

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冰凍切片是借助低溫冷凍將活檢組織快速凍結(jié)達(dá)到一定的硬度進(jìn)行制片的一種方法，手術(shù)中等待冰凍快速病理報(bào)告，以病變性質(zhì)而決定手術(shù)方式和范圍。而及時(shí)、準(zhǔn)確的發(fā)出報(bào)告需要高質(zhì)量的冰凍切片，鑒于冰凍切片常出現(xiàn)染色模糊不清的現(xiàn)象，對(duì)病理判斷造成困難，甚至造成誤診或漏診，實(shí)踐中我們發(fā)現(xiàn)和組織固定、染色時(shí)返藍(lán)有一定關(guān)系，為了提高冰凍制片質(zhì)量，我們將FAA、Bouin氏液、88酒精三種固定液作了比較，并在染色中加用促藍(lán)液，認(rèn)為用88酒精固定液及染色時(shí)加用促藍(lán)液制作的冰凍切片質(zhì)量較理想，

是否有效的祛除了內(nèi)源性酶和生物素 應(yīng)注意的是，并不是每一種組織均需要祛除內(nèi)源性酶和生物素，但對(duì)于內(nèi)源性酶和生物素含量豐富的組織如肝臟、腎臟等，如染色效果不佳，均考慮此原因。處理方法為:（1）滅活堿性磷酸酶:常用的方法是將左旋咪唑（24mg/ml）加入底物液中，并保持pH值在7.6～8.2之間，即能祛除大部分內(nèi)源性堿性磷酸酶，對(duì)于仍能干擾染色的酸性磷酸酶，可用50mmol/L的酒石酸;（2）飽和處理內(nèi)源性生物素:消除內(nèi)源性生物素的方法是事先滴加親和素以飽和內(nèi)源性生物素，使之不再有剩余的結(jié)合位點(diǎn)，具體操承接各類病理實(shí)驗(yàn) 免疫熒光,HE染色服務(wù)實(shí)驗(yàn)、極速周期、經(jīng)營(yíng)豐富、高性價(jià)比、技術(shù)專業(yè)就找融享生物。

檢測(cè)中的顯色反應(yīng)免疫組化顯色是一種酶促反應(yīng)，它通過連結(jié)在抗原抗體復(fù)合物上的過氧化物酶或堿性磷酸酶與底物DAB發(fā)生反應(yīng)，生成有色的復(fù)合物沉淀在組織細(xì)胞中的抗原部位。由于標(biāo)本組織來源不同，細(xì)胞分化不一，抗原含量不等，顯色反應(yīng)所需時(shí)間不可能完全一致。整個(gè)免疫組化過程步驟較多，每步應(yīng)按操作要求嚴(yán)格操作，脫蠟時(shí)間一定要充分。每步PBS沖洗時(shí)間、次數(shù)一定不能省略，因PBS液內(nèi)含有鹽，可以減少背景染色。滴加試劑時(shí)要均勻、足夠，要比切片上的組織界限寬出0.05~0.35cm防止出現(xiàn)邊緣效應(yīng)。即使是同一種抗體，由于產(chǎn)品批號(hào)不同，其效價(jià)可能有差異，因此，新購進(jìn)的抗體一定要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，找出比較好條件并進(jìn)行記錄。此外，組織浸液的溫度，切片烘烤的溫度控制，實(shí)驗(yàn)操作過程中的室內(nèi)溫度及抗體的效價(jià)等都是影響免疫組化標(biāo)記質(zhì)量的重要因素。耐心細(xì)致的工作態(tài)度，標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的操作，是完成實(shí)驗(yàn)的基本保證。免疫組化怎么做就找融享生物。天津動(dòng)物實(shí)驗(yàn)免疫組化

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它的原理

根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理情況，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進(jìn)行反應(yīng)，前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如鏈霉親和素等）結(jié)合，較終通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細(xì)胞或組織中化學(xué)成分，在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。

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