免疫膠體金技術(shù)

免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。

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被檢測的物質(zhì)

組織或細(xì)胞中凡是能作為抗原或半抗原，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測。

6、特點(diǎn)

1）特異性強(qiáng)

免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

2）敏感性高

在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。

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減少或消除非特異性染色的方法  組織中非抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)的陽性染色稱為非特異性背景染色，較好常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結(jié)締組織成分上。有效方法是在用首先抗體前加制備第二抗體動(dòng)物之非免疫血清（1：5-1：20）封閉組織上帶電荷基團(tuán)而除去與首先抗體非特異性結(jié)合。必要時(shí)可加入2%-5%牛血清白蛋白，可進(jìn)一步減少非特異性染色。作用時(shí)間為10-20min。也可用除制備首先抗體以外的其它動(dòng)物血清（非免疫的）。有明顯溶血的血清不能用，以免產(chǎn)生非特異性染色。免疫熒光染色時(shí)，可用0.01%伊文氏蘭(PBS溶液)稀釋熒光抗體,對消除背景的非特異性熒光染色有很好的效果。當(dāng)然使用特異性高、效價(jià)高的首先抗體是較好重要的條件。洗滌用的緩沖液中加入0.85%~1%NaCl成為高鹽溶液,充分洗滌切片,能有效的減少非特異性結(jié)合而減少背景染色。

好壞有著密切的聯(lián)系。由于各種抗原的生化、物理性質(zhì)不同，如溫度高低、酸堿度強(qiáng)弱及各種化學(xué)試劑的作用均可影響抗原的免疫學(xué)活性，良好的細(xì)胞和組織學(xué)結(jié)構(gòu)將有助于抗原的準(zhǔn)確定位。因此，細(xì)胞和組織標(biāo)本的采集制備在免疫組織化學(xué)技術(shù)中占有十分重要的位置。（一）細(xì)胞標(biāo)本的取材目前，免疫組化技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)診斷，如鑒別低分化*與惡性淋巴瘤、黑色素瘤、低分化肉瘤等。CEA應(yīng)用于胸腹水中間皮瘤與*的鑒別，熱修復(fù)法 現(xiàn)常用微波修復(fù)、高溫高壓修復(fù)、水浴加熱修復(fù)法。較常用的修復(fù)法是pH6.0枸櫞酸緩沖液。修復(fù)過程中的注意要點(diǎn)是:（1）達(dá)到規(guī)定的溫度（92℃～95℃以上）;（2）維持一定的時(shí)間，微波修復(fù)、水浴加熱須控制在10～15min，高溫高壓修復(fù)須控制在2min左右;（3）避免切片干涸，如果切片干涸，抗原則可能完全丟失;（4）加熱后必須經(jīng)過室溫自然冷卻20～30min，使未折疊的蛋白分子鏈恢復(fù)天然構(gòu)型。融享生物為您提供一個(gè)專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，吊炸天的免疫組化。

物質(zhì)所具有的抗原性主要由分布在抗原表面的抗原決定簇決定。固定液的固定對免疫組化的正確結(jié)果極其重要，此液能使抗原保存良好?？乖迯?fù)的好壞直接影響著免疫組化檢測結(jié)果的可靠性。在進(jìn)行免疫組化時(shí)并非所有的抗原都要進(jìn)行抗原修復(fù)，抗原性保存良好或基本保存者不需要修復(fù)。目前抗原修復(fù)的方法主要有蛋白酶消化法、硼氫化鈉（NaBH4）修復(fù)法和熱修復(fù)法。較常用的是熱修復(fù)法，尤其是細(xì)胞核抗原經(jīng)熱修復(fù)后，其染色效果特別好。熱修復(fù)包括單純加熱、高壓加熱和微波加熱3種,其原理是以熱效應(yīng)來引導(dǎo)抗原決定基重新暴露。熱修復(fù)法影響抗原修復(fù)的關(guān)鍵因素有兩個(gè)：一是溫度,至少要達(dá)到100 ℃,時(shí)間3～15 min;二是修復(fù)液的pH值為7.5～8.5。所以我們必須清楚影響抗原的因素及各種抗原修復(fù)的方法，嚴(yán)格按照抗體說明書進(jìn)行抗原修復(fù)。鑒于抗原修復(fù)的方法較多，在實(shí)際工作中，究竟選用何種抗原修復(fù)，應(yīng)根據(jù)抗體種類予以選擇，必要時(shí)可以多種方法同時(shí)使用，這樣使其更具有針對性，標(biāo)記結(jié)果更理想。組化染色結(jié)果有很大影響。免疫組化哪里好就找融享生物。江西特殊染色免疫組化實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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    ——90年代分子雜交技術(shù)、原位雜交技術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)分類方法迅速發(fā)展?！?000年各種免疫組化技術(shù)更加成熟，使免疫組化技術(shù)成為當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)中形態(tài)、功能代謝綜合研究的一項(xiàng)有力工具。其應(yīng)用范圍深達(dá)醫(yī)學(xué)各個(gè)學(xué)科，是目前生命科學(xué)工作者應(yīng)該掌握的基本技術(shù)之一。免疫組化技術(shù)技術(shù)分類（1）根據(jù)染色方式分成：①貼片染色②漂浮染色（2）根據(jù)Ag—Ab結(jié)合方式分成：①直接法②間接法③多層法（3）按標(biāo)記物的性質(zhì)分成：①免疫熒光技術(shù)（免疫熒光法）②免疫酶技術(shù)（酶標(biāo)抗體法、橋法、PAD法、ABC法）③免疫金屬技術(shù)（免疫鐵蛋白法、免疫金染色法、蛋白A金法）免疫組化技術(shù)標(biāo)記物（1）必要性：組織細(xì)胞內(nèi)Ag—Ab結(jié)合反應(yīng)一般是不可見的，若在鏡下檢測，則必須具有可視性標(biāo)記物。（2）常用標(biāo)記物①熒光素：較常用的是異硫一氰酸熒光素（Fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）——熒光顯微鏡下呈綠色熒光四乙基羅達(dá)明（rho—damineRB200）——熒光顯微鏡下發(fā)橙紅色熒光②酶：辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶。③生物素：（Biotin）④鐵蛋白金等：主要應(yīng)用于免疫電鏡。其他：如同位素（因涉及污染和防護(hù)難一般不用）免疫組化技術(shù)應(yīng)用凡是組織細(xì)胞內(nèi)具有抗原性的物質(zhì)。黑龍江熒光免疫組化機(jī)構(gòu)哪里有