封片

為了長期保存，我們一般用中性樹膠等封片，避免產(chǎn)生氣泡，方法是直接在載玻片組織上滴一滴封片液，然后一手拿住蓋片某一拐角，而另一手拿對面的那個拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接觸到液體時為止；當發(fā)現(xiàn)液體接觸面在不斷彌散時，則可以緩慢降低另一拐角，這樣一般不會產(chǎn)生氣泡。免疫熒光方法中的重要環(huán)節(jié)

1）冰凍切片制備

建議用新鮮組織，否則組織細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)破壞，易使抗原彌散。選用干凈鋒利的刀片、組織一定要冷凍適度等，防止裂片和脫片嚴重。

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眾所周知，冰凍切片較突出的優(yōu)點就是能夠較完好地保存抗原的免疫活性  ，即具有抗原敏感性高的優(yōu)點  。因此對冰凍切片通常不進行抗原修復 ，而在作免疫組化的研究時往往需要對組織進行固定，固定液（如多聚甲醛、福爾馬林）使組織中的許多氨基酸殘基在分子內(nèi)或分子間形成醛鍵，使得不少抗原決定簇被封閉。同時，由于甲醛的聚合作用，使蛋白分子間相互交聯(lián)形成大分子網(wǎng)絡(luò)，也導致了抗原有一定的封閉作用  ，從而降低了抗原敏感性?？紤]到以上原因，我們對冰凍切片進行高溫高壓抗原修復并作對比研究。吉林特殊染色免疫組化檢測哪里有哪里有可以做免疫組化，病理切片，HE染色的公司-融享生物。

色反應的控制  免疫酶染色應注意控制：①成色質(zhì)濃度和溫育時間可調(diào)節(jié) ，增加成色質(zhì)的量和/或增加底物溫育時間，可增加反應產(chǎn)物強度。著色太深可減少溫育反應時間。②過氧化物酶顯色時，H2O2較大濃度將使顯色反應過快而致背景加深；過量H2O2可能88酶的活性。

  4．復染  根據(jù)所用的染色方法和呈顯顏色等，可選用適當?shù)膹腿痉椒āＨ珀栃越Y(jié)果呈紅或棕色，則用蘇木素將細胞核染成蘭色，以便定位檢測。也可用1%～2%甲基綠復染。

免疫組化可以輔助病理診斷、指導、評估預后，所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要。免疫組化技術(shù)是利用已知的特異性抗體或抗原特異性結(jié)合的特點，通過化學反應使標記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑通過借助顯微鏡的觀察，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織細胞結(jié)構(gòu)的一門組化技術(shù)。在病理診斷、基礎(chǔ)醫(yī)學研究工作中免疫組化技術(shù)已成為非常重要的手段。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標記更加簡便、快捷，更加規(guī)范化，標準化的實驗操作是必不可少的。免疫組化標準化染色技術(shù)是一項實驗性很強的技術(shù)，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都可以直接影響免疫組化結(jié)果病理實驗免疫組化專業(yè)設(shè)備，真實實驗結(jié)果。

檢測中的顯色反應免疫組化顯色是一種酶促反應，它通過連結(jié)在抗原抗體復合物上的過氧化物酶或堿性磷酸酶與底物DAB發(fā)生反應，生成有色的復合物沉淀在組織細胞中的抗原部位。由于標本組織來源不同，細胞分化不一，抗原含量不等，顯色反應所需時間不可能完全一致。整個免疫組化過程步驟較多，每步應按操作要求嚴格操作，脫蠟時間一定要充分。每步PBS沖洗時間、次數(shù)一定不能省略，因PBS液內(nèi)含有鹽，可以減少背景染色。滴加試劑時要均勻、足夠，要比切片上的組織界限寬出0.05~0.35cm防止出現(xiàn)邊緣效應。即使是同一種抗體，由于產(chǎn)品批號不同，其效價可能有差異，因此，新購進的抗體一定要進行預實驗，找出比較好條件并進行記錄。此外，組織浸液的溫度，切片烘烤的溫度控制，實驗操作過程中的室內(nèi)溫度及抗體的效價等都是影響免疫組化標記質(zhì)量的重要因素。耐心細致的工作態(tài)度，標準化、規(guī)范化的操作，是完成實驗的基本保證。上海免疫組化找融享生物科技有限公司。內(nèi)蒙古熒光免疫組化哪家好

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石蠟切片厚4～6μm，撈片于多聚賴氨酸防脫水劑中，60℃烘烤30min～60min，再脫蠟、脫水。這個處理過程的關(guān)鍵是要保證梯度二甲苯和酒精的濃度，使組織脫蠟、脫水干凈徹底，否則，水洗后切片含有“油珠”，呈云霧狀，沖洗不干凈，致使抗體在組織上分布不均，導致染色效果不佳。我科的方法是:普通常規(guī)染色所用的梯度二甲苯和酒精與免疫組織化學染色所用的梯度二甲苯和酒精分開，并且定期更換液體。在二甲苯脫蠟時，二甲苯I和II脫蠟時間不少于半小時，梯度酒精各5min左右。如在室溫較低時，應將梯度二甲苯放于恒溫箱中提前預熱，梯度酒精時間延長，保證組織的充分脫蠟脫水。江西IHC免疫組化公司哪里有