（1）ABC復(fù)合物的制備：（2）ABC法反應(yīng)原理6．SP或SAP法（過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素或過氧化物酶標(biāo)記的堿性磷酸酶染色）Streptavidin/peroxidaseorstrepta-vidin/alkalinephosphatase）※該法是ABC法基礎(chǔ)上的進(jìn)一步改良，使卵白素與鏈霉（而非生物素）結(jié)合，而后再結(jié)合PO。它有4個(gè)亞基可與生物素結(jié)合，靈敏特異，背景低，成本低?，F(xiàn)在還有plus盒。優(yōu)點(diǎn)是：更簡便，放大倍數(shù)↑，等電點(diǎn)中性更適合組織。分子量小，穿透力↑。7．蛋白A—金法（Protein—Agoldmethod）~多用于電鏡8．雙重組化染色法應(yīng)用雙重免疫組織化學(xué)可在同一張切片，同一細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)內(nèi)同時(shí)顯示兩種不同的抗原。9．免疫金—銀染色法（Immunogold—silverstainingIGSS）固定——見前述注意事項(xiàng)：1．固定劑的選擇：因組織而不同，注意質(zhì)量和性能。2．固定方式的選擇：①浸漬固定（參考文獻(xiàn)）②灌注固定（+后固定）③蒸汽固定免疫組化染色步驟（以ABC法為例）1．切片脫蠟入水，入PBS洗三次/15分鐘。2．封閉內(nèi)源性過氧化物酶。用新配置的（在PAS或—HCL緩沖液）室溫，30分鐘。3．水洗，入PBS，洗三次，每次5分鐘。4．減少非特異性著色用稀釋20倍的正常血清（產(chǎn)生二次抗體動(dòng)物血清！），室溫，30分鐘。免疫組化切片 不掉片，厚薄均勻哪里好找上海融享生物。內(nèi)蒙古組織免疫組化檢查機(jī)構(gòu)

免疫組織化學(xué)（Immunohisochemistry）檢測技術(shù)曾被公認(rèn)為病理學(xué)發(fā)展史上的第二個(gè)里程碑，此項(xiàng)技術(shù)發(fā)展到現(xiàn)在，較好充實(shí)了病理學(xué)的內(nèi)容，使病理診斷結(jié)果更精確，將病理學(xué)提高到了形態(tài)和功能相結(jié)合的水平。免疫組織化學(xué)方法的敏感性和特異性直接影響診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。近兩年來，在本科同志的配合下，筆者已做免疫組化420例，取得了很好的效果，并且明顯的提高了診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，支持了對(duì)臨床病人的診療?，F(xiàn)提出以下五點(diǎn)供同道借鑒內(nèi)蒙古組織免疫組化檢查機(jī)構(gòu)免疫組化找融享生物專業(yè)又高效。

分類

1）按標(biāo)記物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、免疫酶標(biāo)法和免疫金銀法等。

2）按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）。與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。

3）按結(jié)合方式可分為抗原-抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（***）法；親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是比較常用的方法；聚合物鏈接，如即用型二步法，此方法尤其適合于內(nèi)源性生物素含量高的組織抗原檢測。

 免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry）又稱 免疫細(xì)胞化學(xué)。它是 組織化學(xué)的分支，它是用標(biāo)記的 特異性抗體（或抗原）對(duì)組織內(nèi)抗原（或抗體）的分布進(jìn)行組織和細(xì)胞原位檢測技術(shù)。 中文名 免疫組化技術(shù) 外文名 Immunohistochemistry 又    稱 免疫細(xì)胞化學(xué) 屬    于 組織化學(xué) 目錄 1 前言 ? 發(fā)展介紹 ? 技術(shù)分類 ? 標(biāo)記物 ? 應(yīng)用 2 免疫組織化學(xué) 免疫組化技術(shù)前言 編輯 免疫組化技術(shù)發(fā)展介紹 ——1941年 Coons 首先用 熒光素 標(biāo)記抗體—檢測肺組織內(nèi)的肺炎雙球菌獲得成功。 —— 60年代 Nakane建立酶標(biāo)抗體技術(shù)——鐵蛋白標(biāo)記Ab技術(shù)。 —— 70年代 Stemberger 改良上述技術(shù)，建立 辣根過氧化物酶——抗體過氧化物酶（***）技術(shù)，使免疫細(xì) 胞化學(xué)得到廣泛應(yīng)用。 —— 80年代 Hsu 等建立了抗生物素—生素（ABC）法之后，免疫金—銀染色法、半抗原標(biāo)記法、 免疫電鏡 技術(shù)相繼問世。 轉(zhuǎn)錄組測序價(jià)格那家好找融享生物。

標(biāo)本

實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。

其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本比較好常用、比較好基本的方法，對(duì)于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對(duì)照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法?？贵w

免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體，單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后，從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

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復(fù)染

目的是形成細(xì)胞輪廓，從而更好地對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定位，經(jīng)常用蘇木素復(fù)染（胞核染料）。注意蘇木素復(fù)染時(shí)間要看當(dāng)時(shí)的室溫、溶液的新舊、目標(biāo)抗原的定位等情況，一般數(shù)秒-數(shù)分鐘，胞漿蛋白可以適當(dāng)時(shí)間長一點(diǎn)，而胞核算白則要短。不過這個(gè)如果染色不理想可以補(bǔ)救的。方法是：染色深則分化時(shí)間稍長些即可；染色淺則再置于蘇木素中染色即可。鹽酸酒精是分化，氨水是返蘭。作用不同。片子復(fù)染完后流水振洗，然后置于鹽酸酒精中數(shù)秒（一定動(dòng)作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返蘭即可。

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