用下一代測(cè)序技術(shù)(next generation sequencing，NGS)測(cè)定

16S/18S/ITS 某個(gè)可變區(qū)的序列，可以反映環(huán)境樣

品在細(xì)菌、、古菌等組成的微生物群落之間的

差異，對(duì)研究海洋、土壤、宿主等不同環(huán)境中的

微生物群落組成及動(dòng)態(tài)變化有重要的指導(dǎo)作用，同

時(shí)也是系統(tǒng)發(fā)育和分類學(xué)研究中一種使用的方法。

顯，能夠反映出種屬間甚至菌株間的差異。此外，

ITS 序列片段較小(ITS1 和 ITS2 長(zhǎng)度分別為 350 bp

和 400 bp 左右，但不同物種之間存在一定差異)，

易于分析。也就是說，ITS 具有更高的擴(kuò)增和測(cè)序

成功率以及分類學(xué)分辨率，目前已被應(yīng)用于真

菌不同種屬的系統(tǒng)發(fā)育分析。 上海融享生物科技有限公司測(cè)序的16s 18S ITS 擁有完善的售后服務(wù)。廣東16S測(cè)序電話

16SrRNA能夠鑒定難 于分類的微生物種類，鑒定培養(yǎng)陰性的細(xì)菌，細(xì)菌種屬的檢測(cè)。 采用16SrRNA法對(duì)微生物分離鑒定時(shí)要注意防止核酸污染出現(xiàn)假 陽性，在檢驗(yàn)標(biāo)本時(shí)控制細(xì)菌的污染。提取的微生物中總DNA能 夠遺傳的多樣性，選擇合適的方法提取樣品中的各種微生物 的基因。避免在探針雜交中出現(xiàn)假陰性結(jié)果，為確定雜交反應(yīng)的 敏感性，所以使用微生物的通用探針作為陽性對(duì)照，對(duì)PCR產(chǎn)物中的嵌合序列進(jìn)行排除。隨著現(xiàn)物信息學(xué)的發(fā)展以及大量微 生物的l6SrRNA基因測(cè)序工作的完成，16SrRNA在醫(yī)學(xué)微生物鑒 定中的應(yīng)用越來越重要。湖南環(huán)境微生物16S測(cè)序ITS 的各種測(cè)序應(yīng)用領(lǐng)域還是不一樣的。

在細(xì)菌的系統(tǒng)分類學(xué)研究中有用的和常 用的分子鐘是 rRNA, 其種類少、含量大(約占細(xì)菌 RNA 含量的 80%), 分子大小適中, 存在于所有的 生物中, 特別是其進(jìn)化具有良好的時(shí)鐘性質(zhì), 在結(jié) 構(gòu)與功能上具有高度的保守性, 素有“細(xì)菌化石” 之稱。rRNA 是細(xì)菌和真核細(xì)胞核糖體的基本組 成部分, 編碼 rRNA 的基因是按 5′- 16S- 23S- 5S- 3′方式排列的, 由兩個(gè)非編碼的間隔區(qū)序列所分 開。16S rDNA、23S rDNA、5S rDNA 三部分組成 一個(gè) RNA 操縱子, 這個(gè)操縱子作為一個(gè)單位進(jìn) 行轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)錄后處理成為成熟的 16S、23S 和 5S rRNA。

１６ＳｒＲＮＡ 序列

分析技術(shù)的基本原理就是利用恒定區(qū)序列設(shè)計(jì)通用引物從微

生物樣本中擴(kuò)增出１６ＳｒＲＮＡ 的 基 因 片 段，通 過 克 隆 測(cè) 序、探

針雜交、酶切片段多態(tài)性分析或凝膠電泳等方 法獲 得 １６Ｓ

ｒＲＮＡ 序列信息，再與１６ＳｒＲＮＡ 基因數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列數(shù)據(jù)或

其他數(shù)據(jù)進(jìn)行同源對(duì)比及分析，從而鑒定樣本中可能存在的病

原菌種類。目前絕大多數(shù)的研究都 是 先 將１６ＳｒＲＮＡ 反 轉(zhuǎn) 錄 為１６ＳｒＤＮＡ 再 進(jìn) 行 進(jìn) 一 步

的研究。也可以提取細(xì)菌總的 ＤＮＡ 之 后，利用細(xì)菌通用引物

對(duì)樣品總 ＤＮＡ 中的１６ＳｒＲＮＡ 基因進(jìn)行全長(zhǎng)擴(kuò)增，再對(duì) ＰＣＲ

產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步研究。 18S 的各種測(cè)序應(yīng)用領(lǐng)域還是不一樣的。

ｒＲＮＡ 鑒定微生物具有高靈敏度和特異性，且

所需檢測(cè)時(shí)間短，不依賴于微生物的分離培養(yǎng)，所以可用于臨

床上快速、準(zhǔn)確鑒定致病微生物，并且可以檢測(cè)出未知的新型

微生物種類。１６ＳｒＲＮＡ 由于高度保守及變異性較小，適 合 于

屬內(nèi)種間的鑒別，而１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 區(qū)間由于具有高度變異

性及相對(duì)保守性，更適合那些１６ＳｒＲＮＡ 無法鑒別而關(guān)系非常

密切的某些菌種和種內(nèi)菌株的鑒別，因此，這兩種檢測(cè)方法各

有所長(zhǎng)，后者是前者的很好補(bǔ)充。但是在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過程中仍

舊存在某些問題，但相信隨著分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展以

及對(duì)１６ＳｒＲＮＡ 及１６Ｓ～２３ＳｒＲＮＡ 區(qū)間基礎(chǔ)和臨床研究的不

斷深入，許多目前在實(shí)驗(yàn)操作中存在的問題一定會(huì)得到更好的

解決。 您知道上海融享生物科技有限公司的16s都有哪些嗎？福建全長(zhǎng)16S測(cè)序公司

對(duì)于不同的需求我們選擇不同的ITS 測(cè)序。廣東16S測(cè)序電話

DNA 探針雜交：PCR 擴(kuò)增含有高變區(qū)的部分 16S rRNA 基 因, 然后用根據(jù) 16S rRNA 基因中高變區(qū)的序列 設(shè)計(jì)出一系列的種特異性的探針與之雜交。通過 16S rRNA 種屬特異性的探針與 PCR 產(chǎn)物雜交以 獲得微生物組成信息。此外, 探針也可以直接與樣 品進(jìn)行原位雜交檢測(cè), 通過原位雜交不僅可以測(cè) 定微生物的形態(tài)特征和豐度, 而且能夠分析它們 的空間分布, 該方法簡(jiǎn)單快速, 主要應(yīng)用于快速檢 測(cè), 但可能出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果。近年來 T Yamamoto 等設(shè)計(jì)和合成出人腸道 區(qū)系中常見的雙歧桿菌屬 5 個(gè)種( 兩歧雙歧桿菌、 青春雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、短雙歧桿菌和長(zhǎng)雙 歧桿菌) 的特異性的寡核苷酸探針, 它們具有 16~ 19 個(gè)堿基長(zhǎng)度, 并與這 5 個(gè)種的 16S rRNA 序列 互補(bǔ)。用天然高分子量的 RNA 制備物作為靶子, 這些寡核苷酸探針對(duì)于人腸道中這些種的菌株具 有高度的種特異性, 結(jié)果表明用此法檢測(cè)這 5 個(gè) 種的 16S rRNA 序列能取得所期望的結(jié)果, 并且 整個(gè)試驗(yàn)過程從獲得純細(xì)胞物后只需 6h 可完成。廣東16S測(cè)序電話