石蠟切片厚4~6μm,撈片于多聚賴氨酸防脫水劑中,60℃烘烤30min~60min,再脫蠟、脫水。這個處理過程的關鍵是要保證梯度二甲苯和酒精的濃度,使組織脫蠟、脫水干凈徹底,否則,水洗后切片含有“油珠”,呈云霧狀,沖洗不干凈,致使抗體在組織上分布不均,導致染色效果不佳。我科的方法是:普通常規(guī)染色所用的梯度二甲苯和酒精與免疫組織化學染色所用的梯度二甲苯和酒精分開,并且定期更換液體。在二甲苯脫蠟時,二甲苯I和II脫蠟時間不少于半小時,梯度酒精各5min左右。如在室溫較低時,應將梯度二甲苯放于恒溫箱中提前預熱,梯度酒精時間延長,保證組織的充分脫蠟脫水。病理實驗 免疫熒光,HE染色服務實驗找融享生物。江蘇免疫學免疫組化機構哪家好
物質所具有的抗原性主要由分布在抗原表面的抗原決定簇決定。固定液的固定對免疫組化的正確結果極其重要,此液能使抗原保存良好??乖迯偷暮脡闹苯佑绊懼庖呓M化檢測結果的可靠性。在進行免疫組化時并非所有的抗原都要進行抗原修復,抗原性保存良好或基本保存者不需要修復。目前抗原修復的方法主要有蛋白酶消化法、硼氫化鈉(NaBH4)修復法和熱修復法。較常用的是熱修復法,尤其是細胞核抗原經熱修復后,其染色效果特別好。熱修復包括單純加熱、高壓加熱和微波加熱3種,其原理是以熱效應來引導抗原決定基重新暴露。熱修復法影響抗原修復的關鍵因素有兩個:一是溫度,至少要達到100 ℃,時間3~15 min;二是修復液的pH值為7.5~8.5。所以我們必須清楚影響抗原的因素及各種抗原修復的方法,嚴格按照抗體說明書進行抗原修復。鑒于抗原修復的方法較多,在實際工作中,究竟選用何種抗原修復,應根據(jù)抗體種類予以選擇,必要時可以多種方法同時使用,這樣使其更具有針對性,標記結果更理想。組化染色結果有很大影響。江蘇免疫學免疫組化機構哪家好病理實驗免疫組化專業(yè)設備,真實實驗結果。
免疫組織化學(Immunohisochemistry)檢測技術曾被公認為病理學發(fā)展史上的第二個里程碑,此項技術發(fā)展到現(xiàn)在,較好充實了病理學的內容,使病理診斷結果更精確,將病理學提高到了形態(tài)和功能相結合的水平。免疫組織化學方法的敏感性和特異性直接影響診斷結果的準確性。近兩年來,在本科同志的配合下,筆者已做免疫組化420例,取得了很好的效果,并且明顯的提高了診斷結果的準確性,支持了對臨床病人的診療。現(xiàn)提出以下五點供同道借鑒
—20℃)凍存——應選較佳稀度凍存。③若工作濃度大于1∶500則要先將原液稀釋十倍,而后分裝10μl/瓶→凍存(-20℃)于冰箱備用。④關于Ab保存應參照說明書。(3)Ab濃度的選擇Ab濃度不可太高或太低,因為Ag-Ab結合需在一定濃度范圍內進行,若一方過剩則形成復合物小且少;極過剩時已形成的復合物亦會解體而呈現(xiàn)假陰性?!⒎茿b濃度越高越好。3.Ab滴片技術——所滴的抗體應與切片上的組織剛好吻合。[注意]滴抗體前需把切片上的水弄干,但不能干片。要領:甩凈組織周圍的水。4.PBS洗滌技術(1)洗滌的目的①保證離子濃度和PH值。②減少非特異反應(平時Ab不可靠很純)(2)方法:洗三次,每次5分鐘。5.Ab孵育技術(1)必須在濕盒內進行,以防抗體的蒸發(fā)和干片。(2)溫度與時間4℃:過夜;37℃:2hor參考說明書6.光鏡控制顯色方法(1)室內操作:注意溫度與時間的關系,室溫較宜5分鐘。(2)染色稍淺亦可拿出,脫水,封片后顏色可加深。對照組和染色結果的評價從以下幾個方面綜合評價:1.陽性染色特點①Ag定位,胞漿、胞核、胞膜、間質具有結構性。(非特異性~細胞與組織無區(qū)別)②染色強度不同:顏色深淺不一。如果要做免疫組化找融享生物。
免疫熒光方法
是較好早建立的免疫組織化學技術。它利用抗原抗體特異性結合的原理,先將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進而還可進行定量分析。由于免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便,所以在臨床病理診斷、檢驗中應用較廣。2)免疫酶標方法
免疫酶標方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來的技術?;驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是較好常用的技術。該方法與免疫熒光技術相比的主要優(yōu)點是:定位準確,對比度好,染色標本可長期保存,適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速,已經衍生出了多種標記方法,且隨著方法的不斷改進和創(chuàng)新,其特異性和靈敏度都在不斷提高,使用也越來越方便。在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統(tǒng)等。
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冰凍切片是借助低溫冷凍將活檢組織快速凍結達到一定的硬度進行制片的一種方法,手術中等待冰凍快速病理報告,以病變性質而決定手術方式和范圍。而及時、準確的發(fā)出報告需要高質量的冰凍切片,鑒于冰凍切片常出現(xiàn)染色模糊不清的現(xiàn)象,對病理判斷造成困難,甚至造成誤診或漏診,實踐中我們發(fā)現(xiàn)和組織固定、染色時返藍有一定關系,為了提高冰凍制片質量,我們將FAA、Bouin氏液、88酒精三種固定液作了比較,并在染色中加用促藍液,認為用88酒精固定液及染色時加用促藍液制作的冰凍切片質量較理想,江蘇免疫學免疫組化機構哪家好