這些常用免疫組織化學(xué)方法的原理如下：

1. 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.

2. 免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

是免疫組織化學(xué)研究中較好常用的技術(shù)．基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過(guò)光鏡或電鏡，對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位或定性研究．

3. 免疫膠體金技術(shù)

就是用膠體金標(biāo)記一抗，二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究

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標(biāo)本

實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。

其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本比較好常用、比較好基本的方法，對(duì)于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對(duì)照觀察；還能長(zhǎng)期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過(guò)程對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中優(yōu)先的組織標(biāo)本制作方法?？贵w

免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體，單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后，從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

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固定若想得到理想的ICC染色結(jié)果、正確地判斷抗原物質(zhì)在組織細(xì)胞內(nèi)的位置，除需有良好酶和抗體外，保持組織細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的不動(dòng)性（Immobility）和免疫活性也是至關(guān)重要的。換言之，如果抗原物質(zhì)在組織細(xì)胞間彌散、丟失或失去免疫活性，無(wú)論如何努力染色都是徒勞的，所以說(shuō)固定是ICC染色中非常重要的一環(huán)。ICC與其它組織學(xué)技術(shù)不同，除要求保存良好的結(jié)構(gòu)外，還需保存組織抗原的免疫活性。一般認(rèn)為，新鮮組織能夠比較大限度地保存組織抗原的免疫活性，但結(jié)構(gòu)較差，易出現(xiàn)抗原彌散丟失現(xiàn)象。Cumming（1980）報(bào)告，不固定的組織切片ICC染色時(shí)，環(huán)鳥(niǎo)苷酸含量丟失80%以上

織材料的處理

  組織材料的處理是獲得良好免疫組織化學(xué)結(jié)果的前提，必需保證要檢測(cè)的細(xì)胞或組織取材新鮮，固定及時(shí)，形態(tài)保存完好，抗原物質(zhì)的抗原性不丟失、不擴(kuò)散和被破壞（下節(jié) 詳述）。

  三、免疫染色

  可在細(xì)胞涂片或組織切片上進(jìn)行免疫染色。一般程序是：①標(biāo)記抗體與標(biāo)本中抗原反應(yīng)結(jié)合；②用PBS洗去未結(jié)合的成分；③直接觀察結(jié)果（免疫熒光直接法）；或顯色后再用顯微鏡觀察（免疫酶直接法）。在此基礎(chǔ)上發(fā)展出間接法，多層法，雙標(biāo)記法等各種方法，將在本書(shū)各有關(guān)章 節(jié) 內(nèi)詳述。

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 免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry）又稱 免疫細(xì)胞化學(xué)。它是 組織化學(xué)的分支，它是用標(biāo)記的 特異性抗體（或抗原）對(duì)組織內(nèi)抗原（或抗體）的分布進(jìn)行組織和細(xì)胞原位檢測(cè)技術(shù)。 中文名 免疫組化技術(shù) 外文名 Immunohistochemistry 又    稱 免疫細(xì)胞化學(xué) 屬    于 組織化學(xué) 目錄 1 前言 ? 發(fā)展介紹 ? 技術(shù)分類 ? 標(biāo)記物 ? 應(yīng)用 2 免疫組織化學(xué) 免疫組化技術(shù)前言 編輯 免疫組化技術(shù)發(fā)展介紹 ——1941年 Coons 首先用 熒光素 標(biāo)記抗體—檢測(cè)肺組織內(nèi)的肺炎雙球菌獲得成功。 —— 60年代 Nakane建立酶標(biāo)抗體技術(shù)——鐵蛋白標(biāo)記Ab技術(shù)。 —— 70年代 Stemberger 改良上述技術(shù)，建立 辣根過(guò)氧化物酶——抗體過(guò)氧化物酶（***）技術(shù)，使免疫細(xì) 胞化學(xué)得到廣泛應(yīng)用。 —— 80年代 Hsu 等建立了抗生物素—生素（ABC）法之后，免疫金—銀染色法、半抗原標(biāo)記法、 免疫電鏡 技術(shù)相繼問(wèn)世。 承接各類病理實(shí)驗(yàn) 免疫熒光,HE染色服務(wù)實(shí)驗(yàn)、極速周期、經(jīng)營(yíng)豐富、高性價(jià)比、技術(shù)專業(yè)就找融享生物。吉林熒光免疫組化檢測(cè)哪里有

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拍照

有條件的話比較好立即拍照，若不能及時(shí)拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。使用熒光顯微鏡注意嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序;應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查;防止紫外線對(duì)眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡;檢查時(shí)間每次以1~2h為宜，超過(guò)90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后，熒光也明顯減弱或褪色;激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間的照射，會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象;所以較多不得超過(guò)2~3h;熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開(kāi)始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再啟用時(shí)，須待燈光充分冷卻后才能點(diǎn)燃。天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。關(guān)閉汞燈至少在開(kāi)啟15-30分鐘后;標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā);使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無(wú)明顯的自發(fā)熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無(wú)熒光鏡油;電源比較好裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不只會(huì)降低汞燈的壽命，也會(huì)影響鏡檢的效果。

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