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來源: 發(fā)布時間:2021-09-20

 免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry)又稱 免疫細胞化學(xué)。它是 組織化學(xué)的分支,它是用標(biāo)記的 特異性抗體(或抗原)對組織內(nèi)抗原(或抗體)的分布進行組織和細胞原位檢測技術(shù)。 中文名 免疫組化技術(shù) 外文名 Immunohistochemistry 又    稱 免疫細胞化學(xué) 屬    于 組織化學(xué) 目錄 1 前言 ? 發(fā)展介紹 ? 技術(shù)分類 ? 標(biāo)記物 ? 應(yīng)用 2 免疫組織化學(xué) 免疫組化技術(shù)前言 編輯 免疫組化技術(shù)發(fā)展介紹 ——1941年 Coons 首先用 熒光素 標(biāo)記抗體—檢測肺組織內(nèi)的肺炎雙球菌獲得成功。 —— 60年代 Nakane建立酶標(biāo)抗體技術(shù)——鐵蛋白標(biāo)記Ab技術(shù)。 —— 70年代 Stemberger 改良上述技術(shù),建立 辣根過氧化物酶——抗體過氧化物酶(***)技術(shù),使免疫細 胞化學(xué)得到廣泛應(yīng)用。 —— 80年代 Hsu 等建立了抗生物素—生素(ABC)法之后,免疫金—銀染色法、半抗原標(biāo)記法、 免疫電鏡 技術(shù)相繼問世。 上海免疫組化切片 不掉片,厚薄均勻找上海融享生物科技有限公司價格更低 服務(wù)更好。免疫組化公司電話


它的原理

根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理情況,組織切片或細胞標(biāo)本中的抗原先和一抗結(jié)合,再利用一抗與標(biāo)記生物素、熒光素等的二抗進行反應(yīng),前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合,較終通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細胞或組織中化學(xué)成分,在光學(xué)顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學(xué)成分的分布和含量。




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免疫組化。染色 免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評估預(yù)后,所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要[1]。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現(xiàn),使抗體的標(biāo)記更加簡便、快捷,更加規(guī)范化。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項實驗性很強的技術(shù),任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)......免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評估預(yù)后,所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要,隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進,特別是即用型試劑盒的出現(xiàn),使抗體的標(biāo)記更加簡便、快捷,更加規(guī)范化。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項實驗性很強的技術(shù),任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題,都可以直接影響免疫組化結(jié)果。

    非特異性染色彌散性均勻)2.組織切片制作過程的影響①固定不良—非特異性染色,顯示不均。②邊緣干燥—非特異性染色(常見),加抗體時勿干片。3.人工假象與特異性結(jié)果顯示不在同一平面上。陽性對照:用已知抗原陽性的切片與待檢標(biāo)本同時進行免疫細胞化學(xué)染色。對照切片呈陽性結(jié)果,標(biāo)為陽性對照。陰性對照:用確證不含已知抗原的標(biāo)本作對照,應(yīng)呈陰性結(jié)果,稱陰性對照。其實這只是陰性對照中的一種,陰性對照還應(yīng)包括空白、替代、吸收和***實驗。▲染色失敗的幾種原因:(1)所染的全部切片均為陰性結(jié)果,包括陽性對照在內(nèi)。全部(-)原因可能:①染色未完全嚴格按照操作步驟進行;②漏加一種抗體,或抗體失效;③緩沖液內(nèi)含疊氮化鈉,***了酶的活性;④底物中所加H2O2量少或失效;⑤復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)(2)所有切片均呈陽性反應(yīng),原因可能是:①切片在染色過程中抗體過濃,或干燥了。②緩沖液配置中未加氯化鈉和PH值不準(zhǔn)確,洗滌不徹底。③使用已變色的呈色底物溶液,或呈色反應(yīng)時間過長。④抗體溫育的時間過長。⑤H2O2濃度過高,呈色速度過快。粘附劑太厚。(3)所有切片背景過深,原因可能是:①未加酶消化處理切片。②切片或涂片過厚。③漂洗不夠。免疫組化服務(wù)性價比高周期短。

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【摘要】目的研究CEA免疫組化染色在檢測系膜微轉(zhuǎn)移及環(huán)周切緣(CRM)侵犯方面的價值。方法選取經(jīng)纖維結(jié)腸鏡及病理證實為直腸*病人40例,應(yīng)用大組織切片技術(shù)對術(shù)后標(biāo)本處理,分別行常規(guī)染色及CEA免疫組化染色,比較分析兩種染色方法在檢測系膜微轉(zhuǎn)移及CRM侵犯方面的價值。結(jié)果CEA染色檢測**浸潤程度大于常規(guī)病理染色,差異有性(t=5.2**<0.001)


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    (1)ABC復(fù)合物的制備:(2)ABC法反應(yīng)原理6.SP或SAP法(過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素或過氧化物酶標(biāo)記的堿性磷酸酶染色)Streptavidin/peroxidaseorstrepta-vidin/alkalinephosphatase)※該法是ABC法基礎(chǔ)上的進一步改良,使卵白素與鏈霉(而非生物素)結(jié)合,而后再結(jié)合PO。它有4個亞基可與生物素結(jié)合,靈敏特異,背景低,成本低?,F(xiàn)在還有plus盒。優(yōu)點是:更簡便,放大倍數(shù)↑,等電點中性更適合組織。分子量小,穿透力↑。7.蛋白A—金法(Protein—Agoldmethod)~多用于電鏡8.雙重組化染色法應(yīng)用雙重免疫組織化學(xué)可在同一張切片,同一細胞或亞細胞結(jié)構(gòu)內(nèi)同時顯示兩種不同的抗原。9.免疫金—銀染色法(Immunogold—silverstainingIGSS)固定——見前述注意事項:1.固定劑的選擇:因組織而不同,注意質(zhì)量和性能。2.固定方式的選擇:①浸漬固定(參考文獻)②灌注固定(+后固定)③蒸汽固定免疫組化染色步驟(以ABC法為例)1.切片脫蠟入水,入PBS洗三次/15分鐘。2.封閉內(nèi)源性過氧化物酶。用新配置的(在PAS或—HCL緩沖液)室溫,30分鐘。3.水洗,入PBS,洗三次,每次5分鐘。4.減少非特異性著色用稀釋20倍的正常血清(產(chǎn)生二次抗體動物血清?。?,室溫,30分鐘。免疫組化公司電話