如肽類、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、受體、表面抗原等等均可用免疫組織化學(xué)方法顯示，因而目前在基礎(chǔ)與臨床科研中被廣泛應(yīng)用。較近幾年，分子生物學(xué)研究異?；钴S，但較終還要?dú)w到形態(tài)上來。用免疫組織化學(xué)方法對所研究的大分子分子進(jìn)行定位，進(jìn)而深入研究其功能。免疫組化技術(shù)免疫組織化學(xué)編輯染色方法1．直接法熒光素直接標(biāo)記特異性抗體（—抗）上，標(biāo)記抗體與抗原結(jié)合（在切片上）熒光顯微鏡下觀察→檢測抗原?！髅笜?biāo)抗體要顯示后鏡檢。直接法優(yōu)點(diǎn)：簡單，時間短，特異性強(qiáng)。缺點(diǎn)：靈敏度低，所需抗體量大（不經(jīng)濟(jì)）。應(yīng)用：基本不用！2．間接法熒光素標(biāo)記在二抗上（二抗：抗產(chǎn)生一抗動物的IgG抗體）?！@色后鏡檢特點(diǎn)：較直接法靈敏，可標(biāo)記一種抗體→鑒定多種抗原。3．非標(biāo)記Ab橋法：“橋法”是酶標(biāo)記抗體的改進(jìn)，經(jīng)過三次抗體，其二抗為未標(biāo)記橋抗體。（1）單橋法(2)雙橋法在三抗之后，將二抗和三抗再重復(fù)一次，可增大染色強(qiáng)度?！锾貏e提示：注意動物種屬關(guān)系4．***法（過氧化物酶—抗過氧化物酶法Peroxidaseanti—peroxidasemethod，***法）~是橋法的改良，既先形成***復(fù)合物→抗原—抗體—抗IgG抗體—***復(fù)合物。該法簡化了操作步驟，提高了靈敏度。免疫組化哪里好就找融享生物。安徽特殊染色免疫組化機(jī)構(gòu)哪里有
石蠟切片由于在制作過程中使用大量有機(jī)溶劑（酒精、二甲苯）和（或）包埋過程中加熱處理使抗原活性喪失，所以通常采用抗原修復(fù)方法來提高石蠟切片免疫組化反應(yīng)的敏感性。而對于冰凍切片的制作由于不經(jīng)過上述過程，在以往的研究中通常不再經(jīng)過抗原修復(fù)而直接做免疫組化。但用冰凍切片做免疫組化研究時通常采用多聚甲醛固定，眾所周知多聚甲醛對抗原有封閉作用，并且在神經(jīng)系統(tǒng)中由于抗原表達(dá)量較微量，造成免疫組化染色中需要配制較高濃度的抗體工作液，造成抗體消耗較大，染色效果不佳。因此本文采用抗原修復(fù)和不修復(fù)兩組切片進(jìn)行免疫組化染色，比較免疫反應(yīng)敏感程度，以期進(jìn)一步提高免疫組化反應(yīng)的敏感性。安徽特殊染色免疫組化機(jī)構(gòu)哪里有上海轉(zhuǎn)錄組技術(shù)比較好的公司找融享生物。
意義編輯
近年來，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn)，使許多疑難得到了明確診斷。在常規(guī)病理診斷中，5%-10%的病例單靠H.E.染色難以作出明確的形態(tài)學(xué)診斷。尤其是免疫組化在診斷和鑒別診斷中的實(shí)用價值受到了普遍的認(rèn)可，其在低分化或未分化的鑒別診斷時，準(zhǔn)確率可達(dá)50%-75%。免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面：
⑴惡性的診斷與鑒別診斷；
⑵確定轉(zhuǎn)移性惡性的原發(fā)部位；
⑶對某類進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型；
⑷軟組織的一般需根據(jù)正確的組織學(xué)分類，因其種類多、組織形態(tài)相像，有時難以區(qū)分其組織來源，應(yīng)用多種標(biāo)志進(jìn)行免疫組化研究對軟組織的診斷是不可缺少的；
⑸發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶，有助于臨床方案的確定，包括手術(shù)范圍的確定。
⑹為臨床提供方案的選擇。
織材料的處理
組織材料的處理是獲得良好免疫組織化學(xué)結(jié)果的前提，必需保證要檢測的細(xì)胞或組織取材新鮮，固定及時，形態(tài)保存完好，抗原物質(zhì)的抗原性不丟失、不擴(kuò)散和被破壞（下節(jié) 詳述）。
三、免疫染色
可在細(xì)胞涂片或組織切片上進(jìn)行免疫染色。一般程序是：①標(biāo)記抗體與標(biāo)本中抗原反應(yīng)結(jié)合；②用PBS洗去未結(jié)合的成分；③直接觀察結(jié)果（免疫熒光直接法）；或顯色后再用顯微鏡觀察（免疫酶直接法）。在此基礎(chǔ)上發(fā)展出間接法，多層法，雙標(biāo)記法等各種方法，將在本書各有關(guān)章 節(jié) 內(nèi)詳述。
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非特異性染色彌散性均勻）2．組織切片制作過程的影響①固定不良—非特異性染色，顯示不均。②邊緣干燥—非特異性染色（常見），加抗體時勿干片。3．人工假象與特異性結(jié)果顯示不在同一平面上。陽性對照：用已知抗原陽性的切片與待檢標(biāo)本同時進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色。對照切片呈陽性結(jié)果，標(biāo)為陽性對照。陰性對照：用確證不含已知抗原的標(biāo)本作對照，應(yīng)呈陰性結(jié)果，稱陰性對照。其實(shí)這只是陰性對照中的一種，陰性對照還應(yīng)包括空白、替代、吸收和***實(shí)驗(yàn)?！旧〉膸追N原因：（1）所染的全部切片均為陰性結(jié)果，包括陽性對照在內(nèi)。全部（－）原因可能：①染色未完全嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行；②漏加一種抗體，或抗體失效；③緩沖液內(nèi)含疊氮化鈉，***了酶的活性；④底物中所加H2O2量少或失效；⑤復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)（2）所有切片均呈陽性反應(yīng)，原因可能是：①切片在染色過程中抗體過濃，或干燥了。②緩沖液配置中未加氯化鈉和PH值不準(zhǔn)確，洗滌不徹底。③使用已變色的呈色底物溶液，或呈色反應(yīng)時間過長。④抗體溫育的時間過長。⑤H2O2濃度過高，呈色速度過快。粘附劑太厚。（3）所有切片背景過深，原因可能是：①未加酶消化處理切片。②切片或涂片過厚。③漂洗不夠。免疫組化專業(yè)技術(shù)比較好的公司找融享生物。江西動物實(shí)驗(yàn)免疫組化實(shí)驗(yàn)
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—20℃）凍存——應(yīng)選較佳稀度凍存。③若工作濃度大于1∶500則要先將原液稀釋十倍，而后分裝10μl/瓶→凍存（-20℃）于冰箱備用。④關(guān)于Ab保存應(yīng)參照說明書。（3）Ab濃度的選擇Ab濃度不可太高或太低，因?yàn)锳g-Ab結(jié)合需在一定濃度范圍內(nèi)進(jìn)行，若一方過剩則形成復(fù)合物小且少；極過剩時已形成的復(fù)合物亦會解體而呈現(xiàn)假陰性?！⒎茿b濃度越高越好。3．Ab滴片技術(shù)——所滴的抗體應(yīng)與切片上的組織剛好吻合。[注意]滴抗體前需把切片上的水弄干，但不能干片。要領(lǐng)：甩凈組織周圍的水。4．PBS洗滌技術(shù)（1）洗滌的目的①保證離子濃度和PH值。②減少非特異反應(yīng)（平時Ab不可靠很純）（2）方法：洗三次，每次5分鐘。5．Ab孵育技術(shù)（1）必須在濕盒內(nèi)進(jìn)行，以防抗體的蒸發(fā)和干片。（2）溫度與時間4℃：過夜；37℃：2hor參考說明書6．光鏡控制顯色方法（1）室內(nèi)操作：注意溫度與時間的關(guān)系，室溫較宜5分鐘。（2）染色稍淺亦可拿出，脫水，封片后顏色可加深。對照組和染色結(jié)果的評價從以下幾個方面綜合評價：1．陽性染色特點(diǎn)①Ag定位，胞漿、胞核、胞膜、間質(zhì)具有結(jié)構(gòu)性。（非特異性～細(xì)胞與組織無區(qū)別）②染色強(qiáng)度不同：顏色深淺不一。安徽特殊染色免疫組化機(jī)構(gòu)哪里有