5．滴加抗體，4℃過液或室溫5′~1hour。6．，洗三次，每次5分鐘。7．滴加第二抗體，室溫15′~60′。8．洗凈，洗三次，每次5分鐘。9．滴加ABC復(fù)合物，室溫15~60分鐘。10．洗三次，每次5分鐘。11．Tris–HCL5~10分鐘，此步可省略。12．DAB—H2O2顯色：用，室溫5~30分鐘，隨時鏡檢（DAB用時新配）13．自來水洗凈。14．用Mayer蘇木素或甲基綠，復(fù)染胞核（可不染）。15．常規(guī)脫水、透明、封固、鏡檢。結(jié)果：棕褐色反應(yīng)產(chǎn)物**抗原X的定位。免疫組化染色基本技術(shù)及注意事項(xiàng)1．實(shí)驗(yàn)計(jì)劃①根據(jù)課題的內(nèi)容選用動物，選用配套的Ab。如Ab—I鼠抗人的抗體，與其他種屬間無交叉，則不能用其他動物，而且Ab-Ⅱ必須是羊抗鼠，若***法Ab-Ⅲ必須來源于鼠，否則不能連接成復(fù)合物。②若要比較染色深淺在對照組與實(shí)驗(yàn)組間的差異，在貼片方面較好貼于同一張載片上，否則無可比性。③選用的試劑可靠，貨源充足，隨時可取。2．Ab稀釋度（如系購買的藥盒有工作液和原液）（1）工作液：無須稀釋（2）原液：①應(yīng)參照其提供的工作液濃度進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)驗(yàn)。如：工作液濃度為1∶1000，可選1∶500，1∶1000，1∶1500試驗(yàn)；若:1∶500有背景，1∶1000陽性反應(yīng)稍淺，可選1∶750進(jìn)行試驗(yàn)。②原液的保存。上海免疫組化，免疫熒光性價比找融享生物高效率周期快。山西動物實(shí)驗(yàn)免疫組化技術(shù)

免疫組化。染色 免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評估預(yù)后，所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要［1］。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進(jìn)，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標(biāo)記更加簡便、快捷，更加規(guī)范化。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)性很強(qiáng)的技術(shù)，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)......免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評估預(yù)后，所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要，隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進(jìn)，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標(biāo)記更加簡便、快捷，更加規(guī)范化。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)性很強(qiáng)的技術(shù)，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都可以直接影響免疫組化結(jié)果。吉林免疫學(xué)免疫組化檢測電話快速高效的制備NGS測序?轉(zhuǎn)錄組測序。

所以它是可以減少背景染色。滴加試劑時要均勻、足夠，要比切片上的組織界限寬出0.05～0.35 cm防止出現(xiàn)邊緣效應(yīng)。即使是同一種抗體，由于產(chǎn)品批號不同，其效價可能有差異，因此，新購進(jìn)的抗體一定要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，找出比較好條件并進(jìn)行記錄。此外，組織浸液的溫度，切片烘烤的溫度控制，實(shí)驗(yàn)操作過程中的室內(nèi)溫度及抗體的效價等都是影響免疫組化標(biāo)記質(zhì)量的重要因素。因此，耐心細(xì)致的工作態(tài)度，標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的操作，是完成實(shí)驗(yàn)的基本保證。

被檢測的物質(zhì)

組織或細(xì)胞中凡是能作為抗原或半抗原，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測。

6、特點(diǎn)

1）特異性強(qiáng)

免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時，才會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

2）敏感性高

在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。

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實(shí)驗(yàn)為例

從我接觸的很多本科生和研究生中發(fā)現(xiàn)，他們的確是免疫組化“新手”，他們只注重如何做和較好終的結(jié)果，但對為什么這樣做不太感興趣。他們常按照網(wǎng)上所說的方法，摸索好的抗體濃度和條件后做出很漂亮的染色結(jié)果后，他們就認(rèn)為自己已經(jīng)掌握了免疫組化方法了，結(jié)果不求上進(jìn)，更換一種新抗體后或?qū)嶒?yàn)出現(xiàn)異常結(jié)果后就很難做出來了。當(dāng)然，免疫組化對于我來說，做過很多，但也不能說什么都會，只不過我做的多了，失敗多了和思考多了，可能比新手多了解一些其中的訣竅，拿來與大家進(jìn)行分享。此外，我個人經(jīng)驗(yàn)不可能面面俱到，還需要更多有經(jīng)驗(yàn)的高手一起分享、糾正和補(bǔ)充。在這里。

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常用染色方法

根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗體）在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法較好常用。判定分析編輯

免疫組化染色（IHC）

免疫組化染色（IHC）

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果而言，免疫組化技術(shù)服務(wù)主要涉及抗體實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述與分析，圖片的確定與選取，相關(guān)數(shù)據(jù)的提供，上述工作是免疫組化工作的重點(diǎn)內(nèi)容，只有嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)操作，專業(yè)化的結(jié)果分析才能更好的滿足客戶的要求，這點(diǎn)對于形式為腹水，上清，培養(yǎng)液之類的抗體顯得更為重要。關(guān)于上述服務(wù)內(nèi)容應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)開始前由雙方明確，一般而言，客戶方實(shí)驗(yàn)前應(yīng)提出需要什么樣的結(jié)果與分析，例如是簡要還是詳細(xì)的描述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，需要實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)否，圖片的數(shù)量與規(guī)格等。如果為雙盲試驗(yàn)或有第三方參與，則事先申明。

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