評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中。可以選擇多種策略來評估轉(zhuǎn)染效率。實時聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)是一種通過直接測量特定外源蛋白表達水平來評估轉(zhuǎn)染效率的定量方法。細胞內(nèi)核酸或其他可能受到外源核酸(如miRNAs)影響的細胞內(nèi)核酸。在瞬時轉(zhuǎn)染的情況下，每次轉(zhuǎn)染后都應(yīng)進行qPCR，以確保良好的轉(zhuǎn)染效率，然后再進行下游實驗。與質(zhì)粒報告系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染是另一種策略，可以通過表達特定的報告蛋白(如熒光素酶或β-半乳糖苷酶)來評估轉(zhuǎn)染效率。采用小RNA熒光素酶報告系統(tǒng)以干擾(RNAi)研究為例，miRNA轉(zhuǎn)染成功的標志是熒光素酶活性下調(diào)，這是由于miRNA與轉(zhuǎn)錄的熒光素酶mRNA 3'端結(jié)合導(dǎo)致mRNA降解。熒光顯微鏡是評估轉(zhuǎn)染效率的另一種常見、簡便、快速的方法。它通常涉及使用攜帶熒光報告基因或標記有熒光團的寡核苷酸的載體來進行熒光檢測。然而，熒光顯微鏡只能提供對轉(zhuǎn)染效率的定性或半定量測量，這可以使用ImageJ等專門軟件來確定。隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率。新疆鄭州轉(zhuǎn)染試劑

在大腸桿菌細胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個應(yīng)用領(lǐng)域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長。這些結(jié)果來源于使用表達促炎細胞因子(如IL-12)的轉(zhuǎn)基因或甚至不含外源轉(zhuǎn)基因的載體的研究。**的生長抑制似乎是由CpG基序引起的，因為這些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序?qū)?*生長的抑制的確切性質(zhì)尚不清楚。產(chǎn)生的細胞因子對腫瘤細胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一個恰當?shù)睦邮荌L-12的能力，在響應(yīng)含CpG基序時產(chǎn)生，引發(fā)抗血管生成反應(yīng)。其他細胞因子，如IFN-g(自身為CpG誘導(dǎo)的細胞因子)誘導(dǎo)的細胞因子，即IP10和Mig，也能夠具有抗血管生成特性。安徽轉(zhuǎn)染試劑便宜人類原代干細胞是另一種公認的難以轉(zhuǎn)染的細胞類型，轉(zhuǎn)染這種細胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細胞活力低。

除了mRNA疫苗，DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下，研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進了PG和PAMAM G4復(fù)合物的大小、運動性和表面電荷，然后在BALB/c小鼠中測試疫苗設(shè)計的免疫原性。根據(jù)研究結(jié)果，由于同時包裝在PG和PAMAM G4包膜中，DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復(fù)合物的小鼠中，觀察到**強的t細胞反應(yīng)，并且這些反應(yīng)明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動物組。

化學轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。基于脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑是一種化學物質(zhì)，它能夠形成帶正電的脂質(zhì)聚集體，這些聚集體可以與宿主細胞的磷脂雙分子層順利融合，從而允許外來遺傳物質(zhì)以**小的阻力進入。另一方面，非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可進一步分為幾類，包括磷酸鈣、樹狀大分子、聚合物、納米顆粒和非脂質(zhì)體。磷酸鈣是轉(zhuǎn)染中使用的低價的化學物質(zhì)之一，轉(zhuǎn)染涉及將帶正電的鈣離子(Ca2+)與帶負電的核酸結(jié)合，形成沉淀，然后被宿主細胞吸收。然而，磷酸鈣轉(zhuǎn)染的成功率較低，需要事先優(yōu)化才能達到較高的轉(zhuǎn)染效率。樹狀大分子是三維的、高度支化的有機大分子，可以與核酸形成復(fù)合物，作為一種替代的非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，它優(yōu)于磷酸鈣。然而，使用樹狀大分子的轉(zhuǎn)染效率仍然低于病毒載體和脂質(zhì)體試劑。陽離子聚合物也可以與帶負電荷的核酸形成復(fù)合物，這有助于細胞通過內(nèi)吞作用吸收遺傳物質(zhì)。與病毒載體相比，陽離子聚合物產(chǎn)生的細胞毒性較小，但效率也較低。納米顆粒由于其體積小，增強了核酸進入宿主細胞的能力，正在成為非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的替代選擇。基因注射包括通過注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細胞核中。

轉(zhuǎn)染時通常推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基，包括陽離子轉(zhuǎn)染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。這種轉(zhuǎn)染活動需要形成陽離子脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物，這需要帶正電的脂質(zhì)體分子和帶負電的核酸之間的相互作用。因此，血清中負電荷分子的存在可能會影響這種復(fù)雜的相互作用，從而影響轉(zhuǎn)染效率。然而，發(fā)現(xiàn)10%血清的存在導(dǎo)致FuGENE HD、jetPEI、Lipofectamine 2000和Arrest-In轉(zhuǎn)染MCF-7、HeLa、C2C12和MC3T3的轉(zhuǎn)染效率更高。研究表明，轉(zhuǎn)染中少量的血清可以通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)染復(fù)合物的zeta電位來改善轉(zhuǎn)染復(fù)合物與其宿主細胞表面之間的表面相互作用。研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內(nèi)轉(zhuǎn)運核酸的能力。新疆鄭州轉(zhuǎn)染試劑

影響物理轉(zhuǎn)染或機械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。新疆鄭州轉(zhuǎn)染試劑

質(zhì)子泵抑制劑可以通過基于從一個供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測量來評估，也可以通過化學測量來評估，在化學測量中，表達的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時通過適當?shù)膱蟾嫦到y(tǒng)來檢測。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進行基因組編輯。除了使用多個質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達兩種不同基因的載體，通過一個內(nèi)部核糖體進入位點連接，只有一個啟動子。新疆鄭州轉(zhuǎn)染試劑