**近的研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內(nèi)轉運核酸的能力。這些特征包括陽離子頭基團及其鄰近的脂肪鏈在主鏈上呈1,2關系，醚鍵用于橋接脂肪鏈到主鏈，成對的油基鏈作為疏水系鏈。無論如何，這些特征雖然不能決定細胞培養(yǎng)中更好的轉染能力，但可以在體內(nèi)實現(xiàn)更好的核酸遞送。因此，必須謹慎對待體外和細胞培養(yǎng)的結果，不能必然地用來推斷核酸載體在體內(nèi)的潛力。當這些囊泡在體內(nèi)引入時，其他因素(如顆粒直徑)變得更加重要。使用脂質(zhì)體時遇到的毒性通常與制劑中陽離子脂質(zhì)與核酸之間的電荷比、所使用的制劑類型以及所給脂質(zhì)體的劑量密切相關。較高的電荷比通常對多種細胞類型的毒性更大，包括*細胞系。另外，不同的試劑對細胞的毒性程度不同，毒性是細胞特異性的。目前市面上有超過30種不同的商用CL制劑品種可供選擇。由于毒性，脂質(zhì)體的體內(nèi)遞送必須盡可能靠近目標部位，以盡量減少副作用。基因注射包括通過注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細胞核中。lipo3000轉染試劑企業(yè)

不同種類的納米顆粒轉染細胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測試表明，納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉染方法相當。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質(zhì)體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉染劑對COS-1細胞系(非洲綠猴腎成纖維細胞樣細胞)使用四種不同的轉染介質(zhì)所取得的轉染效果。固體脂質(zhì)na-noparticles轉染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉染組的熒光素酶基因表達效率沒有統(tǒng)計學上的***差異，在每種轉染介質(zhì)中保持相同水平。然而，獲得的轉染效率低于使用商業(yè)轉染劑EscortTM 的效率，該轉染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細胞(人肝細胞肝*細胞系)上使用固體脂質(zhì)納米顆粒，實現(xiàn)了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達水平。lipo3000轉染試劑企業(yè)轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。

隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉染的效率。其中一種是通過化學修飾來提高其與靶標和阻斷外切酶活性的結合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物，旨在發(fā)揮比傳統(tǒng)miRNA模擬物更高的靶標抑制活性(krtzfeldt另一方面，antagomir是一種專門設計的單鏈miRNA類似物，旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認為更穩(wěn)定、更有效、更特異，而且與正常的模擬物或拮抗劑相比，對宿主細胞膜具有更高的結合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸，其至少一個核苷酸具有額外的亞甲基橋，以增強其核糖環(huán)結構的穩(wěn)定性。其鎖定的核糖結構使得LNA比常用的寡核苷酸更短，從而使其比傳統(tǒng)的寡核苷酸表現(xiàn)出更高的效率、穩(wěn)定性和結合親和力。NA基寡核苷酸的應用已被報道用于各種生化或功能分析，涉及遞送小RNA分子，如siRNA、miRNA和piRNA。一些基于NA基的轉染不需要轉染試劑，這可以比較大限度地減少轉染過程中試劑的二次效應。

在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。通常，質(zhì)粒轉染和寡核苷酸轉染實驗都需要陽性對照、陰性對照、未轉染對照和模擬轉染對照。陽性對照是先前已被證明對轉染實驗產(chǎn)生已知影響的DNA或RNA，例如影響特定下游遺傳靶點的表達。在轉染工作的初始階段，需要一個陽性對照來建立一個優(yōu)化的轉染方案，之后，陽性對照可以作為參考，與實驗組進行比較。另一方面，陰性對照用于確認宿主細胞中預期的基因表達變化是否歸因于轉染而不是其他原因。在質(zhì)粒DNA轉染中，陰性對照可以是缺乏DNA和轉染載體的反應，或者兩者都沒有，只有宿主細胞。在小RNA轉染中，陰性對照包含一個非同源序列，該序列通常是一個與靶序列具有相同核苷酸長度和組成但與任何已知哺乳動物基因不同源的打亂序列。未轉染的對照包括不含轉染試劑和核酸的細胞培養(yǎng)，作為宿主細胞基本信息的對照，包括活力、表型，更重要的是，不受轉染影響的靶基因的基線表達水平。模擬轉染是指不含遺傳靶標或核酸的轉染，可以評估轉染試劑(如背景自熒光噪聲)產(chǎn)生的影響。在質(zhì)粒轉染實驗中，推薦使用空質(zhì)粒對照作為模擬轉染對照。PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的，是一個用作基因載體的聚酯。

納米顆粒，由于其在DNA轉運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉基因的非病毒載體。通過將納米粒子與許多不同的配體和化合物連接來修飾納米粒子，有助于改善它們在細胞內(nèi)的運輸。將納米顆粒靶向到細胞內(nèi)的特定位置，配子和胚胎，可以通過磁轉染來實現(xiàn)。盡管與市售的用于體外培養(yǎng)細胞的轉染試劑相比，使用納米顆粒轉染具有相當?shù)男屎透偷募毎拘?，但仍需要證明以這種方式傳遞DNA會導致體內(nèi)相似水平的基因表達，特別是考慮到該技術可能導致副作用。與DNA轉染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。中國澳門DOTAP 轉染試劑

選擇合適的轉染試劑可能取決于幾個因素，包括轉染核酸的類型和轉染的復雜性(單轉染或共轉染)。lipo3000轉染試劑企業(yè)

脂質(zhì)顆粒的加入導致內(nèi)體DNA釋放增加。Delgado等人通過在腎細胞中添加魚精蛋白，設法提高了固體脂質(zhì)納米顆粒的轉染效率，但與不添加魚精蛋白的對照組相比，相同的多功能單元，DNA/魚精蛋白/SLN(固體脂質(zhì)納米顆粒)，降低了HEK 293細胞系(人胚胎腎細胞)的轉染效率。這給了我們希望，通過加入必要的配體的可能性，使用納米顆粒的轉染可能會調(diào)整到給定的細胞類型。Bahrami et al.經(jīng)表明，不同種類的納米顆粒以不同的方式與細胞膜結合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀，也取決于不同納米顆粒所表現(xiàn)出的各種粘附電位以及它們進入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實驗表明，納米顆粒的大小對COS-1(非洲綠猴腎細胞)和HEK 293細胞系的轉染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時，轉染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中，小顆粒和大顆粒的細胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的，這表明使用納米顆粒進行基因傳遞的效率受到許多因素的影響，它們的使用應該根據(jù)細胞類型和應用條件進行具體調(diào)整。此外，用作納米顆粒分散劑的不同物質(zhì)，如十六種不同類型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白，對其在溶液中的團聚有***影響。lipo3000轉染試劑企業(yè)