轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里,轉染因其廣泛應用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑,可以發(fā)現(xiàn)可能用于疾病診斷和預后的特定生物標志物。此外,轉染可以作為基因***中的策略之一,用于***無法***的遺傳性遺傳病。***,生命科學技術的進步允許將不同類型的核酸轉染到哺乳動物細胞中,這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA,如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉染可分為穩(wěn)定轉染和瞬時轉染兩種類型。穩(wěn)定轉染是指通過將外源DNA整合到宿主核基因組中,或在宿主核中作為染色體外元件維持一個外源載體來維持轉基因的長期表達。該轉基因可然后通過細胞的復制進行本構性表達。相比之下,瞬時轉染不需要將核酸整合到宿主細胞基因組中。核酸可以以質粒的形式或寡核苷酸的形式轉染。因此,隨著宿主細胞的復制,轉基因表達**終會丟失。瞬時轉染通常用于短期研究,以研究特定基因敲入/敲入的影響。相比之下,穩(wěn)定轉染在需要大規(guī)模蛋白質生產的長期遺傳和藥理學研究中很有用。在轉染中,DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質粒)轉運到宿主細胞中。安徽DNA轉染試劑
納米顆粒在疫苗遞送中往往表現(xiàn)出***的佐劑作用。陽離子聚合物,包括PEI、聚賴氨酸、陽離子葡聚糖和陽離子明膠,已經有報道顯示出對Th1反應的強烈刺激,其特征是誘導CD4(+)T細胞增殖和th1相關細胞因子的分泌。此外,陽離子聚合物強烈抑制LPS誘導的巨噬細胞分泌TNF-α。陽離子聚合物的刺激能力與其陽離子化程度有關,陽離子聚合物與陰離子聚合物的中和可以完全消除刺激作用。聚合物的分子量也會影響其刺激能力,分子越大意味著刺激能力越大。遼寧小鼠轉染試劑在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前,應先確定其實驗需要。
陽離子脂質體合成中常用的分子是中性脂質二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進膜融合,并有助于質膜或核內體的不穩(wěn)定。此外,由于陽離子脂質相互排斥,因此需要DOPE等輔助脂質來穩(wěn)定陽離子脂質體(CLs)懸浮液,并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉染作用。沒有中性脂質的脂質體具有較低的轉染率,盡管情況并非總是如此。不同的轉染率可能是由用于配制脂質體的陽離子:中性脂質的不同比例引起的。如上所述,CLs介導的核酸轉移的成功取決于許多因素,這些因素可能解釋了脂質體(脂質體介導的轉染)的內在變異性,特別是在體內。
攜帶要轉染的特定核酸的載體構建可以進一步分為病毒載體或質粒載體。病毒和質粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發(fā)免疫原性反應,而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結構轉移到宿主細胞中。其中一些需要物理方法,而另一些涉及使用遞送載體,可能是脂質載體或非脂質載體,以幫助增強載體載體復合物與宿主細胞膜之間的接觸,從而促進復合物進入細胞。設計和啟動轉染試驗可能具有挑戰(zhàn)性,特別是可供選擇的轉染方法或策略種類繁多的情況下。但似乎找到一種既能改善基因表達又不影響細胞、不對細胞造成損害的技術也至關重要。
為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA,含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。雖然有幾項研究已經調查了血液成分如何使脂質和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定,對于介導細胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進入血液后會發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質體成分不強烈附著于復合物將從顆粒中脫落,而新的成分,如脂蛋白,可以粘附在復合物的表面。這不僅會導致顆粒的不穩(wěn)定,還會改變生物分布或促進體內***。了解在體內遞送的每個階段(在給藥部位,在血液循環(huán)過程中,在***和組織的細胞外基質中,以及**終進入靶細胞時),多聚物和脂聚物的組成如何變化,可能有助于設計具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)。轉染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。西藏干細胞轉染試劑
PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質)制成的,是一個用作基因載體的聚酯。安徽DNA轉染試劑
在轉染中,DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質粒)轉運到宿主細胞中。質粒的基本結構包括啟動子、復制起點、多個克隆位點、目標基因和選擇標記。質粒復制需要復制的起源,而多個克隆位點包含獨特的內切酶切割位點,用于插入外源基因。適當?shù)恼婧藛幼?如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細胞中表達。質粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉染。與線性DNA相比,使用超螺旋質粒DNA轉染通常會產生更高的效率,線性DNA更容易被外切酶降解。然而,線性化的DNA更具重組性,因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉染。安徽DNA轉染試劑