轉(zhuǎn)染是將外來(lái)核酸傳遞到真核細(xì)胞中以修飾宿主細(xì)胞的遺傳組成的過(guò)程。在過(guò)去的30年里，轉(zhuǎn)染因其廣泛應(yīng)用于研究疾病的細(xì)胞過(guò)程和分子機(jī)制而越來(lái)越受歡迎。了解疾病的分子途徑，可以發(fā)現(xiàn)可能用于疾病診斷和預(yù)后的特定生物標(biāo)志物。此外，轉(zhuǎn)染可以作為基因***中的策略之一，用于***無(wú)法***的遺傳性遺傳病。***，生命科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步允許將不同類型的核酸轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA)，核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA，如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉(zhuǎn)染可分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染兩種類型。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指通過(guò)將外源DNA整合到宿主核基因組中，或在宿主核中作為染色體外元件維持一個(gè)外源載體來(lái)維持轉(zhuǎn)基因的長(zhǎng)期表達(dá)。該轉(zhuǎn)基因可然后通過(guò)細(xì)胞的復(fù)制進(jìn)行本構(gòu)性表達(dá)。相比之下，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不需要將核酸整合到宿主細(xì)胞基因組中。核酸可以以質(zhì)粒的形式或寡核苷酸的形式轉(zhuǎn)染。因此，隨著宿主細(xì)胞的復(fù)制，轉(zhuǎn)基因表達(dá)**終會(huì)丟失。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染通常用于短期研究，以研究特定基因敲入/敲入的影響。相比之下，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染在需要大規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)的長(zhǎng)期遺傳和藥理學(xué)研究中很有用?；蚴顷?yáng)離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。甘肅南京轉(zhuǎn)染試劑

評(píng)估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中?？梢赃x擇多種策略來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)是一種通過(guò)直接測(cè)量特定外源蛋白表達(dá)水平來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的定量方法。細(xì)胞內(nèi)核酸或其他可能受到外源核酸(如miRNAs)影響的細(xì)胞內(nèi)核酸。在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的情況下，每次轉(zhuǎn)染后都應(yīng)進(jìn)行qPCR，以確保良好的轉(zhuǎn)染效率，然后再進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。與質(zhì)粒報(bào)告系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染是另一種策略，可以通過(guò)表達(dá)特定的報(bào)告蛋白(如熒光素酶或β-半乳糖苷酶)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。采用小RNA熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)以干擾(RNAi)研究為例，miRNA轉(zhuǎn)染成功的標(biāo)志是熒光素酶活性下調(diào)，這是由于miRNA與轉(zhuǎn)錄的熒光素酶mRNA 3'端結(jié)合導(dǎo)致mRNA降解。熒光顯微鏡是評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的另一種常見(jiàn)、簡(jiǎn)便、快速的方法。它通常涉及使用攜帶熒光報(bào)告基因或標(biāo)記有熒光團(tuán)的寡核苷酸的載體來(lái)進(jìn)行熒光檢測(cè)。然而，熒光顯微鏡只能提供對(duì)轉(zhuǎn)染效率的定性或半定量測(cè)量，這可以使用ImageJ等專門軟件來(lái)確定。深圳轉(zhuǎn)染試劑便宜轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是另一個(gè)可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。

此外，病毒濃度被認(rèn)為是影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的另一個(gè)因素。在Haas等人的評(píng)估中測(cè)試的其他幾個(gè)參數(shù)中，即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構(gòu)建，纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)培養(yǎng)基中添加多陽(yáng)離子硫酸魚精蛋白，只有病毒滴度似乎與病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率直接相關(guān)。轉(zhuǎn)染介質(zhì)的條件也可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。例如，在轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中，使用胎牛血清比牛血清產(chǎn)生更好的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。同樣，研究表明，deae-葡聚糖等多陽(yáng)離子可以比較大限度地減少帶負(fù)電荷細(xì)胞之間的排斥力，并促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。影響化學(xué)轉(zhuǎn)染效率的因素

deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。通過(guò)用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化，這使得它可以自組裝成帶負(fù)電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個(gè)用于核酸轉(zhuǎn)染的陽(yáng)離子聚合物。早在20世紀(jì)50年代，它就極大地增強(qiáng)了脊髓灰質(zhì)炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染。隨后，deae -葡聚糖被廣泛應(yīng)用于RNA或DNA的轉(zhuǎn)染。然而，由于以下原因，deae -葡聚糖并沒(méi)有作為比較好候選物:轉(zhuǎn)染效率遠(yuǎn)低于脂質(zhì)體等其他試劑;deae -葡聚糖的細(xì)胞毒性和免疫原性不容忽視。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有影響。

納米顆粒的尺寸很小，但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面，同時(shí)具有高穩(wěn)定性。正因?yàn)槿绱?，它們能夠成功地穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞，并與自然發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)途徑結(jié)合，具有將特定顆粒帶到預(yù)定目標(biāo)位置的***準(zhǔn)確性。由于納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和保護(hù)化合物方面具有巨大的潛力，可以避免酶的消化或儲(chǔ)存在核內(nèi)體中，因此納米顆粒作為細(xì)胞過(guò)程成像的工具，作為將藥物攜帶到細(xì)胞內(nèi)的各種系統(tǒng)的一部分，或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過(guò)官能團(tuán)和非共價(jià)鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結(jié)合的特性類似于體內(nèi)DNA和抑制蛋白之間的自然結(jié)合。在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸外源DNA的效率受到兩個(gè)主要因素的限制:內(nèi)吞作用，穿過(guò)細(xì)胞膜的方式，或適當(dāng)?shù)募?xì)胞受體***和內(nèi)體屏障的破壞。研究表明，在細(xì)胞內(nèi)，與熒光標(biāo)記物連接的納米顆粒聚集在靠近細(xì)胞核的溶酶體中，但它們不會(huì)穿過(guò)核膜。事實(shí)上，這并沒(méi)有干擾特定基因結(jié)構(gòu)編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)，這證明了納米顆?？梢詤⑴c內(nèi)體途徑，并可以通過(guò)細(xì)胞質(zhì)將DNA運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞核。不同種類的化學(xué)物質(zhì)有不同的納米粒子，它們具有不同的性狀、化學(xué)性質(zhì)、物理性質(zhì)和結(jié)構(gòu)。在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。西藏肺轉(zhuǎn)染試劑

脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽(yáng)離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs)。甘肅南京轉(zhuǎn)染試劑

流式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞，以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。另一種評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的方法是通過(guò)監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染后的特定蛋白表達(dá)。將轉(zhuǎn)基因引入細(xì)胞可能會(huì)改變由轉(zhuǎn)基因或細(xì)胞中其他基因編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)。同樣，轉(zhuǎn)染小RNA也可以調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞中特定下游遺傳靶點(diǎn)的表達(dá)。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評(píng)估轉(zhuǎn)染后蛋白表達(dá)的變化。在這兩種方法中，使用特異性抗體結(jié)合靶蛋白是至關(guān)重要的，后者需要使用與一抗結(jié)合的熒光標(biāo)記二級(jí)抗體來(lái)檢測(cè)感興趣的蛋白質(zhì)。另一方面，在免疫印跡中，可以使用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的二抗與一抗結(jié)合，進(jìn)行特異性蛋白檢測(cè)。免疫印跡法允許對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行半定量，而免疫熒光染色法允許通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行定量檢測(cè)。通過(guò)檢查特定蛋白表達(dá)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率更具可重復(fù)性和直接性。然而，使用抗體所固有的非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合問(wèn)題和獲得假陰性結(jié)果的可能性，這可能是由于不及時(shí)測(cè)定蛋白質(zhì)表達(dá)引起的，仍然是使用這些方法的缺點(diǎn)。甘肅南京轉(zhuǎn)染試劑