攜帶要轉(zhuǎn)染的特定核酸的載體構(gòu)建可以進一步分為病毒載體或質(zhì)粒載體。病毒和質(zhì)粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉(zhuǎn)基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發(fā)免疫原性反應(yīng)，而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到宿主細胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質(zhì)載體或非脂質(zhì)載體，以幫助增強載體載體復(fù)合物與宿主細胞膜之間的接觸，從而促進復(fù)合物進入細胞。設(shè)計和啟動轉(zhuǎn)染試驗可能具有挑戰(zhàn)性，特別是可供選擇的轉(zhuǎn)染方法或策略種類繁多的情況***式細胞術(shù)可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉(zhuǎn)染效率。DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

**近的研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內(nèi)轉(zhuǎn)運核酸的能力。這些特征包括陽離子頭基團及其鄰近的脂肪鏈在主鏈上呈1,2關(guān)系，醚鍵用于橋接脂肪鏈到主鏈，成對的油基鏈作為疏水系鏈。無論如何，這些特征雖然不能決定細胞培養(yǎng)中更好的轉(zhuǎn)染能力，但可以在體內(nèi)實現(xiàn)更好的核酸遞送。因此，必須謹慎對待體外和細胞培養(yǎng)的結(jié)果，不能必然地用來推斷核酸載體在體內(nèi)的潛力。當這些囊泡在體內(nèi)引入時，其他因素(如顆粒直徑)變得更加重要。使用脂質(zhì)體時遇到的毒性通常與制劑中陽離子脂質(zhì)與核酸之間的電荷比、所使用的制劑類型以及所給脂質(zhì)體的劑量密切相關(guān)。較高的電荷比通常對多種細胞類型的毒性更大，包括*細胞系。另外，不同的試劑對細胞的毒性程度不同，毒性是細胞特異性的。目前市面上有超過30種不同的商用CL制劑品種可供選擇。由于毒性，脂質(zhì)體的體內(nèi)遞送必須盡可能靠近目標部位，以盡量減少副作用。海南轉(zhuǎn)染試劑價格人類原代干細胞是另一種公認的難以轉(zhuǎn)染的細胞類型，轉(zhuǎn)染這種細胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細胞活力低。

魚精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用，其具體作用機制主要包括以下幾個方面：一、保護RNA免受降解魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于其帶正電荷的特性，可以與帶負電荷的RNA通過相反電荷驅(qū)動耦合23。在生物系統(tǒng)中，RNA很容易被RNase降解，而魚精蛋白可以與RNA復(fù)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而保護RNA免受降解1213。例如，通過將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚精蛋白復(fù)合，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213。二、增強細胞穿透性魚精蛋白不僅可以保護RNA，還能增強RNA的穿透細胞的能力。魚精蛋白-RNA復(fù)合物的形成具有雙重功能，一方面保護RNA不被降解，另一方面增強其穿透進入細胞的能力23。這種增強的細胞穿透性可能是由于魚精蛋白的陽離子性質(zhì)，使其能夠與細胞膜相互作用，促進RNA的進入細胞2。

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑陽離子脂質(zhì)體：如LipofectamineTM2000等陽離子脂質(zhì)體是常用的轉(zhuǎn)染試劑。通過優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，如轉(zhuǎn)染前細胞融合度、質(zhì)粒質(zhì)量與脂質(zhì)體體積比及轉(zhuǎn)染時間等，可以提高轉(zhuǎn)染效率。例如，在脂質(zhì)體介導(dǎo)RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雞成骨細胞的試驗中，當轉(zhuǎn)染前細胞融合達到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對細胞的毒性作用較小4。二、利用天然陽離子肽混合物——魚精蛋白作為穩(wěn)定劑和增強劑：魚精蛋白不僅可以作為肝素的中和藥物和緩釋胰島素配方中的化合物，還可以用于核酸的細胞遞送。自***作為轉(zhuǎn)染增強劑使用以來，魚精蛋白已被***用作RNA遞送的穩(wěn)定劑。它能保護RNA免受生物系統(tǒng)內(nèi)的降解，并增強其對細胞的穿透能力。例如，魚精蛋白穩(wěn)定的RNA遞送系統(tǒng)可以根據(jù)***目標進行調(diào)整，如與靶向抗體融合實現(xiàn)精確遞送、消化成細胞穿透肽提高轉(zhuǎn)染效率或與功能性聚合物非共價混合等。基因是陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種常用的將外源基因?qū)爰毎姆椒?，脂質(zhì)體大?。褐|(zhì)體的大小也可能影響轉(zhuǎn)染效率。較小的脂質(zhì)體可能更容易進入細胞，但可能攜帶的 DNA 量較少。較大的脂質(zhì)體可能攜帶更多的 DNA，但可能更難進入細胞。研究發(fā)現(xiàn)，陽離子脂質(zhì)體的大小與轉(zhuǎn)染效率之間存在一定的關(guān)系。隨著脂質(zhì)體尺寸的增加，轉(zhuǎn)染的主要途徑可能從網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用轉(zhuǎn)變?yōu)橹そ閷?dǎo)的內(nèi)吞作用，同時也可能觀察到巨胞飲作用。這種變化可能會影響脂質(zhì)體在細胞內(nèi)的運輸和釋放，從而影響轉(zhuǎn)染效率。為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。福建轉(zhuǎn)染試劑效率高

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場變革。DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

納米顆粒遞送藥物并發(fā)揮功能的能力在很大程度上取決于它們被細胞攝取的機制。以蒲公英湯劑體為例，研究發(fā)現(xiàn)親溶酶體物質(zhì)能***抑制蒲公英湯劑體進入細胞；巨胞飲抑制劑細胞松弛素D和阿米洛利能***降低蒲公英湯劑體的胞內(nèi)攝入，且呈現(xiàn)劑量依賴性，敲減Rac1和PAK1也有效地抑制其進入細胞。這些結(jié)果提示蒲公英湯劑體通過內(nèi)吞進入A549細胞且主要由巨胞飲介導(dǎo)26。同理，RNA轉(zhuǎn)染試劑在某些情況下也可能利用巨胞飲途徑進入細胞。電穿孔轉(zhuǎn)染中的內(nèi)吞途徑電穿孔轉(zhuǎn)染是一種用于基因遞送的技術(shù)，在研究其機制時發(fā)現(xiàn)，用冰冷介質(zhì)處理或在電穿孔轉(zhuǎn)染前使用內(nèi)吞抑制劑處理三種不同的人類細胞系（HEK293、HCT116和HT29）。結(jié)果表明，用冰冷介質(zhì)、氯丙嗪或染料木黃酮處理會***降低所有三種細胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率，但阿米洛利處理對電穿孔轉(zhuǎn)染效率影響不***。對于用小干擾RNA（siRNA）處理的細胞，只有敲低網(wǎng)格蛋白重鏈（CLTC）會導(dǎo)致所有三種細胞系的電穿孔轉(zhuǎn)染效率降低。這些數(shù)據(jù)表明，網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用在電穿孔轉(zhuǎn)染中起著重要作用27。DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑