考慮RNA需求較少的RNA需求可以降低實驗成本，同時也可以減少對細胞的潛在毒性。比較不同試劑的RNA用量：不同的轉(zhuǎn)染試劑可能需要不同量的RNA才能達到相同的轉(zhuǎn)染效果。在選擇比較好的RNA轉(zhuǎn)染試劑并將其與電穿孔法進行病毒RNA的比較的研究中，某些商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑在適當優(yōu)化后，細胞死亡少得多，RNA需求少，轉(zhuǎn)染效率提高3?？紤]實驗規(guī)模：如果實驗需要大量轉(zhuǎn)染細胞，那么選擇RNA需求較少的試劑可以降低成本。例如，在大規(guī)模的細胞培養(yǎng)實驗中，選擇RNA需求少的轉(zhuǎn)染試劑可以節(jié)省成本和資源。四、考慮血清兼容性在有血清的情況下能夠遞送RNA的轉(zhuǎn)染試劑可以簡化實驗操作，提高實驗的可重復性。血清對轉(zhuǎn)染的影響：一些轉(zhuǎn)染試劑在有血清的情況下可能會降低轉(zhuǎn)染效率，而另一些試劑則可以在血清存在的情況下正常工作。在比較不同商業(yè)RNA轉(zhuǎn)染試劑將黃熱病病毒（YFV）和丙型肝炎病毒（HCV）RNA復制子遞送至Huh7細胞的能力的研究中，討論了與高效轉(zhuǎn)染相關的因素，以及在存在血清的情況下能夠遞送RNA的優(yōu)勢3。選擇血清兼容的試劑：如果實驗需要在有血清的條件下進行，那么選擇血清兼容的轉(zhuǎn)染試劑是必要的。例如，在一些細胞培養(yǎng)實驗中，血清是細胞生長所必需的。 在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關重要。天津西安轉(zhuǎn)染試劑

二、影響因素的差異細胞接種密度：不同類型的細胞在比較好轉(zhuǎn)染效率下的細胞接種密度不同。例如，宮頸*細胞Hela和Siha的比較好接種密度為每24孔板的每孔1.5×10?個細胞1，而研究中Caco-2細胞的比較好接種密度為2×10?9。DNA用量：各種細胞所需的DNA用量也存在差異。如PC12細胞轉(zhuǎn)染的比較好DNA用量為2μg3，而Caco-2細胞轉(zhuǎn)染時比較好DNA用量為4μg9。脂質(zhì)體與DNA的比例：不同細胞類型對應的比較好脂質(zhì)體與DNA的比例不同。Hela細胞中miRNA與脂質(zhì)體比例為1:0.5，Siha細胞中為1:0.71；Caco-2細胞轉(zhuǎn)染時比較好脂質(zhì)體與DNA比例為2.5:19。復合物形成時間和孵育時間：不同細胞類型對脂質(zhì)體-DNA復合物的形成時間和細胞與復合物的孵育時間要求不同。例如，Hela和Siha細胞未明確提及復合物形成時間和孵育時間，而Caco-2細胞的比較好脂質(zhì)體-DNA復合物形成時間為30min，細胞與復合物孵育時間為6h9。內(nèi)蒙古體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。

優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法篩選**適電壓和脈沖時間：不同細胞種類電轉(zhuǎn)所需的**適電壓和脈沖時間不同。例如，人成纖維細胞電轉(zhuǎn)modRNA的**適電壓為440V，**適脈沖時間為30ms；Hela、293T、3T3細胞電轉(zhuǎn)**適電壓分別為425V、400V、440V，**適脈沖時間均為30ms；人/兔外周血來源的懸浮的單個核細胞的**適電壓分別為840V和860V，**適脈沖時間均為20ms。通過篩選**適電壓和脈沖時間，可以提高RNA轉(zhuǎn)染效率，同時證明了電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)染modRNA進入細胞的可行性，且可同時將兩種modRNA導入同一個細胞內(nèi)6。RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。

RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時用單獨形成的納米載體轉(zhuǎn)染細胞（平行共轉(zhuǎn)染），分析決定共轉(zhuǎn)染效率的定量參數(shù)。同時遞送siRNA和mRNA也表明整合方法的比較高共轉(zhuǎn)染效率，但由于兩個**運營實體的峰值輸出在動力學上不同，連續(xù)交付的效率比較高。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對轉(zhuǎn)染效率也有影響。

對細胞活力的影響：一些研究表明，在陽離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導下雞TRPV6基因RNA干擾（RNAi）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入成骨細胞的實驗中，當轉(zhuǎn)染前細胞融合達到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對細胞的毒性作用較小3。在人肝瘤兩種細胞模型中，通過比較LipofectamineRnaimax和Genmute轉(zhuǎn)染劑發(fā)現(xiàn)，用基因***的細胞呈現(xiàn)熒光陰性對照siRNA的更高攝取，并且觀察到與基因轉(zhuǎn)染的細胞相對于脂質(zhì)積rnaimax的細胞具有較高的活力6。有研究使用兩種常見的RNA干擾（RNAi）轉(zhuǎn)染試劑DharmaFECT1和INTERFERin，在模擬轉(zhuǎn)染中使用非靶向siRNAs，結(jié)果表明這些試劑會引起HeLa細胞脂質(zhì)組的變化，但功能影響仍有待研究，這也暗示在RNAi實驗中使用適當?shù)哪M轉(zhuǎn)染對照非常重要。

肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強烈的毒性反應，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。內(nèi)蒙古體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑

在大腸桿菌細胞中復制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細菌DNA中的頻率相似。天津西安轉(zhuǎn)染試劑

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種常用的基因轉(zhuǎn)染方法，不同類型的細胞在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染過程中會表現(xiàn)出不同的特性和差異。以下是對脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對不同類型細胞影響差異的詳細分析：

一、轉(zhuǎn)染效率的差異宮頸*細胞：對于Hela細胞和Siha細胞，當細胞接種密度為每24孔板的每孔1.5×10?個細胞，miRNA量為1μl，Hela細胞中miRNA與脂質(zhì)體比例為1:0.5，Siha細胞中為1:0.7時，24小時后可獲得比較高轉(zhuǎn)染效率1。與含血清的培養(yǎng)基相比，只有Siha細胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，在轉(zhuǎn)染前能獲得更高的轉(zhuǎn)染效率（P＜0.01）1。PC12細胞：lipo2000轉(zhuǎn)染PC12細胞的比較好轉(zhuǎn)染條件為lipo2000用量為5μL，DNA2μg，轉(zhuǎn)染時間為6h，這種條件下的PC12細胞轉(zhuǎn)染率高達40%，且未影響細胞的正常分泌3。HepG2細胞：陽離子脂質(zhì)體的擴散系數(shù)在lipoplex形成過程中與lipoplex的物理化學特性、lipoplex中質(zhì)粒DNA的可及性以及每代謝活性的基因表達對數(shù)密切相關2。隨著脂質(zhì)體尺寸的增加，主要的內(nèi)吞途徑從網(wǎng)格蛋白介導的內(nèi)吞轉(zhuǎn)變?yōu)橹そ閷У膬?nèi)吞，此外，所有脂質(zhì)體尺寸均觀察到巨胞飲作用2。骨髓間充質(zhì)干細胞：脂質(zhì)體介導的CD基因在鼠骨髓間充質(zhì)干細胞中成功表達，于轉(zhuǎn)染48h后達峰值5。

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