磁共振成像(MRI)技術(shù)磁共振成像技術(shù)是目前較為先進(jìn)的醫(yī)學(xué)影像技術(shù)之一,在動(dòng)物成像中也得到了廣泛應(yīng)用。優(yōu)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼部磁共振成像技術(shù):王戰(zhàn)京、雷建鋒、焦昆的研究通過(guò)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼部的磁共振成像技術(shù),提高了眼科疾病研究的準(zhǔn)確性,并促進(jìn)了新治療方法的研發(fā)1。他們選用了健康的SD大鼠,利用Bruker7.0TMRI掃描儀進(jìn)行檢測(cè),通過(guò)精確的定位和細(xì)致的掃描參數(shù)調(diào)整,對(duì)比了T2WI與FLASH兩種成像技術(shù)。研究結(jié)果顯示,F(xiàn)LASH序列在眼部結(jié)構(gòu)成像中展現(xiàn)出更高的信噪比,從而提供了更為清晰的圖像和更豐富的組織細(xì)節(jié)。3T動(dòng)物磁共振成像傳導(dǎo)冷卻超導(dǎo)磁體研究:陳順中、王秋良、孫萬(wàn)碩采用傳導(dǎo)冷卻技術(shù)研制了一臺(tái)3T動(dòng)物磁共振成像超導(dǎo)磁體9。該磁體采用主動(dòng)屏蔽型結(jié)構(gòu),包含同軸排列的6個(gè)主線圈和2個(gè)屏蔽線圈。研究還采用了分段和失超傳播加速策略的被動(dòng)失超保護(hù)方法,保護(hù)超導(dǎo)磁體免于意外失超造成的損害。低溫系統(tǒng)使用雙極G-M制冷機(jī)直接將超導(dǎo)磁體從室溫冷卻到工作溫度,無(wú)需液氦。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,該超導(dǎo)磁體在直徑φ180mm的球形區(qū)域產(chǎn)生高均勻度磁場(chǎng)用于成像。deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。河南轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體
動(dòng)物視網(wǎng)膜成像技術(shù)為基礎(chǔ)研究提供了有力工具。從小鼠視網(wǎng)膜多種成像方式探討眼科光學(xué)成像技術(shù)進(jìn)展:張鵬飛、張廷瑋、宋維業(yè)闡述了近年來(lái)在小鼠和人眼視網(wǎng)膜高精度光學(xué)成像領(lǐng)域出現(xiàn)的技術(shù)突破6。幾種在人眼視網(wǎng)膜成像中廣泛應(yīng)用的光學(xué)成像技術(shù)在動(dòng)物視網(wǎng)膜中得到了成功應(yīng)用,實(shí)現(xiàn)了對(duì)動(dòng)物視網(wǎng)膜的高精度細(xì)胞級(jí)別成像,為科研工作者提供了有力工具。同時(shí),動(dòng)物視網(wǎng)膜的研究工作也開發(fā)了一些新型成像技術(shù)或增強(qiáng)了對(duì)人眼視網(wǎng)膜功能機(jī)理的理解。綜上所述,動(dòng)物成像技術(shù)在磁共振成像、熱成像、X射線發(fā)光成像、近紅外高光譜成像、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物超高場(chǎng)磁共振腦成像、新型動(dòng)物搖籃的小動(dòng)物多重成像、紅外成像以及動(dòng)物視網(wǎng)膜成像等方面都取得了***的發(fā)展,為動(dòng)物研究和相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展提供了重要的技術(shù)支持。陜西inhibtor轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用對(duì)照對(duì)于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。
網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑呼吸道合胞病毒(RSV)是導(dǎo)致嬰幼兒***的主要病毒病原體。研究表明,網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)型內(nèi)吞途徑是目前研究得較為透徹且經(jīng)典的病毒入胞途徑。其中網(wǎng)格蛋白在此途徑中的地位很重要。通過(guò)針對(duì)網(wǎng)格蛋白重鏈的小干擾RNA(siRNA)抑制網(wǎng)格蛋白的表達(dá),可以有效的抑制RSV***Hela細(xì)胞。這提示網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑在病毒感染細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮重要作用,同時(shí)也暗示了在某些情況下,RNA轉(zhuǎn)染試劑可能利用這一途徑進(jìn)入細(xì)胞21。二、小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑在研究非病毒載體用于小干擾RNA(siRNA)遞送時(shí)發(fā)現(xiàn),將用組氨酸和半胱氨酸修飾的HIV-1Tat肽(mTat)與聚乙烯亞胺(PEI)結(jié)合,并與陽(yáng)離子兩親脂質(zhì)基試劑INTERFERin(INT)組合成的雜合載體(mTat/PEI/INT)能高效遞送siRNA。研究表明,F(xiàn)ilipinIII和β-環(huán)糊精(小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用抑制劑)能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉(zhuǎn)染,而氯丙嗪(網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用抑制劑)則不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉(zhuǎn)染。此外,mTat/PEI/INT在4°C時(shí)的轉(zhuǎn)染效率明顯低于37°C。這些結(jié)果表明,mTat/PEI/INT作為一種潛在的有吸引力的非病毒載體用于siRNA遞送,其轉(zhuǎn)染過(guò)程可能是通過(guò)小窩蛋白介導(dǎo)且依賴溫度的內(nèi)吞途徑實(shí)現(xiàn)的。
對(duì)基因表達(dá)的影響:在微小RNA-1180轉(zhuǎn)染對(duì)腎*細(xì)胞生長(zhǎng)的影響的研究中,腎*細(xì)胞分為兩組:dsControl組和miR-1180組。實(shí)時(shí)定量(qRT)-PCR檢測(cè)p21mRNA的表達(dá)變化,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后,786-O和ACHN細(xì)胞中p21mRNA水平分別上調(diào)(P〈)和(P〈),p21蛋白表達(dá)趨勢(shì)與qRT-PCR結(jié)果相符,CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)。同時(shí),流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期變化顯示細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期,MTS結(jié)果顯示細(xì)胞活力明顯降低,集落形成實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞增殖能力降低。結(jié)論是miR-1180能******腎*細(xì)胞中p21蛋白的表達(dá),并抑制腎*細(xì)胞786-O和ACHN的生長(zhǎng)1。在微小RNA-330-5p過(guò)表達(dá)對(duì)宮頸*細(xì)胞C33A中腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子4(TRAF4)基因表達(dá)的抑制作用和對(duì)C33A細(xì)胞增殖的影響的實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑分別向?qū)m頸*細(xì)胞系C33A瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-330-5p模擬物(設(shè)為實(shí)驗(yàn)組)或者轉(zhuǎn)染miR-NC(設(shè)為對(duì)照組),結(jié)果顯示與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組C33A細(xì)胞中TRAF4mRNA下降(p<),TRAF4蛋白下降(p<)。集落形成實(shí)驗(yàn)顯示,實(shí)驗(yàn)組C33A細(xì)胞的增殖能力明顯下降(p<)。結(jié)論是miR-330-5p可通過(guò)降低宮頸*細(xì)胞C33A中TRAF4的表達(dá)抑制宮頸*細(xì)胞C33A的增殖。 人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。
靶向特定基因座提高穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效率:在布魯氏錐蟲中,利用RNAi的構(gòu)建體和(GFP)標(biāo)記的蛋白的表達(dá),靶向(hyg)標(biāo)記的核糖體RNA(RRNA)基因座,可以規(guī)避位置效應(yīng)并提高靶向效率。該系統(tǒng)還利用新的誘導(dǎo)型RRNA啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)T7RNA聚合酶(T7RNAP)轉(zhuǎn)錄,然后從誘導(dǎo)型T7啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá),可減輕當(dāng)前表達(dá)系統(tǒng)的一些問(wèn)題9。綜上所述,提高RNA轉(zhuǎn)染效率的策略包括選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑、利用魚精蛋白、優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法、采用RNA電穿孔、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法以及靶向特定基因座等。這些策略可以根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需求和細(xì)胞類型進(jìn)行選擇和組合,以提高RNA轉(zhuǎn)染效率,為RNA研究和應(yīng)用提供有力支持。是由非離子核酸與陽(yáng)離子脂質(zhì)體(CLs)表面結(jié)合,形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。西藏轉(zhuǎn)染試劑公司
轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是另一個(gè)可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。河南轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體
emlikiForestvirus相關(guān)細(xì)胞:利用基于SemlikiForestvirus的RNA和DNA向量研究非病毒細(xì)胞穿透肽遞送載體PepFect6與陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000的轉(zhuǎn)染效率,并評(píng)估它們對(duì)病毒復(fù)制的影響。結(jié)果表明,PepFect6***證明能夠?qū)⒋螅?3-19kbp)構(gòu)建體轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)細(xì)胞膜。但使用PepFect6試劑遞送的DNA分子被發(fā)現(xiàn)比使用Lipofectamine2000試劑遞送的DNA分子晚約。***,雖然PepFect6和Lipofectamine2000試劑都可用于alphavirus研究,但PepFect6更受青睞,因?yàn)樗粫?huì)引起正常細(xì)胞表型的變化,也不會(huì)影響先前轉(zhuǎn)染細(xì)胞中病毒的正常復(fù)制***周期12。奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞:應(yīng)用帶有FAM標(biāo)記的miRNA-185mimics為報(bào)告基因,檢測(cè)兩種不同轉(zhuǎn)染試劑(LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000)在細(xì)胞接種12、18、24h后的轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示,無(wú)論使用Lipofectamine2000還是LipofectamineRNAiMAX作為奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑,各組間12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h,18h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于24h;LipofectamineRNAiMAX各時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。使用LipofectamineRNAiMAX作為奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑時(shí),12h的熒光強(qiáng)度極***高于18、24h。 河南轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體