Co-IP的優(yōu)勢: 1. 生理相關性:Co-IP可以在接近生理條件的條件下捕獲蛋白質相互作用。 2. 特異性:使用特異性抗體可以提高實驗的特異性。 3. 廣泛應用:Co-IP技術適用于多種樣本類型,包括細胞培養(yǎng)、組織樣本等。 Co-...
免疫沉淀技術RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)的實驗方法基于以下幾個關鍵步驟: 1. 細胞裂解:首先,細胞或組織樣本被裂解,以釋放細胞內的蛋白質和RNA復合物。 2.抗體特異性結合:裂解后的樣本中加入針對特...
免疫沉淀是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法??贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后,再與蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶聯(lián)的珠子(agarose或Sepharose)孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物,沉...
細胞被支原體污染后可能會出現(xiàn)以下幾種情況: 1. 生長速度變慢:支原體污染的細胞生長速度可能會減慢,甚至停止生長。 2. 形態(tài)改變:部分細胞可能會變圓,從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細胞在支原體污染后,形態(tài)變化可能不明顯,但有些細胞可能會出現(xiàn)體積增大、細...
免疫沉淀是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法??贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后,再與蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶聯(lián)的珠子(agarose或Sepharose)孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物,沉...
免疫沉淀技術的實驗方法通常包括以下步驟: 1. 樣本準備 2. 細胞裂解:使用裂解緩沖液(含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質降解)裂解細胞,釋放蛋白質。 3. 蛋白質濃度測定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質的濃...
免疫沉淀Co-IP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結構 (直徑 50-150 μm) 可以結合抗體 (繼而結合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結構,這使得它們擁...
ChIP(染色質免疫沉淀)實驗是一種用于研究蛋白質與DNA相互作用的技術。以下是ChIP實驗的實驗方法概述: 1. 交聯(lián):將細胞與交聯(lián)劑(如1%甲醛)孵育,通常在室溫下進行10-15分鐘。 2. 終止交聯(lián):添加甘氨酸以終止交聯(lián)反應,孵育5分鐘。...
免疫沉淀技術(Immunoprecipitation, IP)的實驗方法通常包括以下步驟: 1. 樣本準備 2. 蛋白質濃度測定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質的濃度。 3. 抗體預處理:如果使用預固定的...
支原體的預防可通過以下方式: 1. 控制污染源:通過定期檢測和去除細胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細胞培養(yǎng)體系內無支原體存在,從而獲得準確有效的實驗數(shù)據(jù)。 2. 改善無菌操作技術:通過提高實驗人員的操作技術和意識,避免在細胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染...
支原體污染一旦發(fā)生,不僅對細胞培養(yǎng)造成嚴重影響,甚至可能導致實驗結果失真。而且支原體污染在細胞培養(yǎng)實驗中相當常見。因此,預防措施是確保細胞培養(yǎng)環(huán)境和實驗結果可靠性的重要手段。 01/ 良好的無菌技術及實驗操作,保證操作不會引入新的污染 02...
對于同一個樣品,如果PCR檢測結果為陽性而一步法恒溫檢測試劑盒結果為陰性,可能的原因包括: 1. 靈敏度差異:PCR方法通常具有較高的靈敏度,可以檢測到單個拷貝的支原體DNA。相比之下,一步法恒溫檢測試劑盒可能需要更高的支原體拷貝數(shù)才能檢測...
支原體去除試劑使用后,對支原體的檢測可能會有影響。一些支原體去除試劑通過特異性地與支原體膜結合、改變支原體膜的通透性來殺死支原體,而對真核細胞幾乎沒有影響。然而,某些情況下,去除試劑可能會對細胞的活力和形態(tài)產生一定的影響,尤其是在去除劑作用期間。此外,如果...
免疫共沉淀分析(Co-IP)實驗原理與IP十分類似,基本的技術都是采用目標抗原特異性的固相化抗體;但IP的目標是純化單一抗原,而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結合的蛋白質或配體。 在Co-IP實驗中,已知抗原稱為誘餌蛋白,與之結合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白...
細胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陽性結果可能由以下原因引起: 1. 擴增產物污染:PCR擴增產生的大量DNA拷貝若未妥善處理,極微量的污染就可能導致假陽性結果。 2. 引物設計不當:引物設計不夠特異性,可能會與非目標序列發(fā)生反應,導致非特異性擴增。 ...
免疫沉淀技術(Immunoprecipitation, IP)是一種利用抗體與特定蛋白質結合的特性,從復雜樣本中分離和純化目標蛋白質的實驗方法。這項技術在生物醫(yī)學研究中有著廣泛的應用場景,以下是一些主要的應用領域: 1. 蛋白質相互作用分析:通過免疫...
支原體是一類細菌,由于缺乏細胞壁,具有靈活的膜結構。這使得支原體的形態(tài)多變,很難在高倍顯微鏡下識別。并且能夠抵抗壓力、溫度、滲透壓和脫水,對許多針對細胞壁合成的常見抗*素具有抗性。它們的體積非常小,直徑通常在0.15~0.3μm,因此能夠輕易地穿過過濾系統(tǒng)...
支原體的預防可通過以下方式: 1. 控制污染源:通過定期檢測和去除細胞培養(yǎng)中的支原體污染,確保細胞培養(yǎng)體系內無支原體存在,從而獲得準確有效的實驗數(shù)據(jù)。 2. 改善無菌操作技術:通過提高實驗人員的操作技術和意識,避免在細胞培養(yǎng)過程中引入支原體污染...
免疫沉淀(Co-IP)實驗中抗體的選擇非常關鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。 1. 特異性:抗體應當對目標蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結合,導致假陽性結果。 2. 親和力:抗體對目標蛋白的親和力要足夠...
免疫沉淀(ChIP)實驗中抗體的選擇非常關鍵,因為抗體的特異性和親和力直接影響到實驗的成功與否。 1. 特異性:抗體應當對目標蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結合,導致假陽性結果。 2. 親和力:抗體對目標蛋白的親和力要足夠高...
細胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陰性結果可能由以下原因引起: 1. 樣本質量問題:如果采集的樣本中含有抑制劑或者樣本在處理、存儲過程中出現(xiàn)問題,可能會影響PCR反應,導致假陰性。 2. 技術或操作問題:實驗操作中的誤差,如樣本處理不當、試劑配制錯誤、...
支原體檢測的應用場景非常廣*,以下是一些主要的應用領域: 1. 細胞培養(yǎng):在實驗室和生物制品工廠中,細胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導致細胞功能改變,影響實驗結果和生物制品的質量。因此,支原體檢測在細胞培養(yǎng)的質量控制中至關重要??蒲兄?..
免疫沉淀技術RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)的實驗方法基于以下幾個關鍵步驟: 1. 細胞裂解:首先,細胞或組織樣本被裂解,以釋放細胞內的蛋白質和RNA復合物。 2.抗體特異性結合:裂解后的樣本中加入針對特...
對于同一個樣品,如果一步法恒溫試劑盒檢測結果為陽性,而PCR檢測為陰性,可能的原因包括: 1. 檢測的支原體種類不同:一步法恒溫試劑盒可能檢測的支原體種類更多,例如可以涵蓋27種支原體,而PCR檢測可能只針對常見的12種支原體進行檢測。因此,如果樣品...
細胞培養(yǎng)中建議使用支原體檢測的原因主要有以下幾點: 1. 支原體污染率高:常規(guī)細胞培養(yǎng)中支原體污染率保守估計在15-35%之間。 2. 影響實驗結果:支原體污染會嚴重干擾實驗結果的可信度,影響培養(yǎng)細胞的形態(tài)和生理特征。 3. 難以用光學顯...
支原體污染后的細胞是否應該直接丟棄還是嘗試重新培養(yǎng),這取決于多種因素,包括細胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法來清*支原體。以下是一些處理支原體污染的常見方法: 1. 直接丟棄:對于非重要的細胞,如果培養(yǎng)中的細胞、WCB的細胞等,可以采取...
目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動物、昆蟲和植物中,其中 20 +種在細胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實驗室中的傳播來源多種多樣,主要來源包括實驗室人員、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外,來自其他實驗...
免疫沉淀RIP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結構 (直徑 50-150 μm) 可以結合抗體 (繼而結合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結構,這使得它們擁有更...
Co-IP(Co-Immunoprecipitation,共免疫沉淀)的實驗方法通常包括以下步驟: 1. 細胞培養(yǎng)與裂解:細胞在適宜的培養(yǎng)條件下生長到適當?shù)拿芏取? 蛋白質分離:裂解后的細胞混合物通過離心去除未破碎的細胞碎片和未裂解的細胞。收集上...
對于同一個樣品,如果PCR檢測結果為陽性而一步法恒溫檢測試劑盒結果為陰性,可能的原因包括: 1. 靈敏度差異:PCR方法通常具有較高的靈敏度,可以檢測到單個拷貝的支原體DNA。相比之下,一步法恒溫檢測試劑盒可能需要更高的支原體拷貝數(shù)才能檢測...