酵母雙雜交實驗表明,PtMADS11 與 PtDAL1 之間存在直接的相互作用(圖 C),并通過 BiFC、GST pull-down 得以證實(圖 D-E)。為進一步研究在年齡信號調(diào)控中的作用機制,分別構(gòu)建了過表達PtDAL1和PtMADS11的擬南芥。與對照相比,過表達PtDAL1***提前了擬南芥的營養(yǎng)-生殖時相轉(zhuǎn)換(圖A),證實PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了關(guān)鍵作用。過表達PtMADS11植株在短日照下表現(xiàn)出早開花和花序結(jié)構(gòu)過早終止,表明PtMADS11在開花調(diào)節(jié)和花序內(nèi)分生組織命運起到調(diào)控作用。在擬南芥中利用年齡調(diào)控通路不同節(jié)點關(guān)鍵基因突變體進行功能互補實驗,結(jié)果顯示過表達PtDAL1可以恢復(fù)由于過表達miR156導(dǎo)致的開花延遲,但ft缺失會導(dǎo)致PtDAL1失活,PtDAL1過表達也不能恢復(fù)soc1-1-2突變體的表型,表明PtDAL1依賴或處于FT/SOC1的上游。而過表達PtMADS11可以恢復(fù)由過表達miR156或ft缺失導(dǎo)致的開花延遲,表明PtMADS11對開花的調(diào)控不依賴于miR156或FT。酵母雙雜交文庫構(gòu)建實驗流程。陜西宣傳酵母文庫做什么
酵母文庫:2021年11月,山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院張振魯團隊在MolecularPlantPathology(IF:5.663)發(fā)表了題為“Nitrate-inducibleMdBT2actsasarestrictionfactortolimitapplenecroticmosaicvirusgenomereplicationinMalusdomestica”的研究論文,報道了MdBT2蛋白在抑制病毒ApNMV基因組RNA復(fù)制中的作用。文章中所用酵母文庫為歐易生物構(gòu)建。ApNMV與ApMV相似,含有3種正義單鏈基因組RNAs:RNA1(編碼1a蛋白,后面你會經(jīng)??吹剿?,對病毒復(fù)制至關(guān)重要),RNA2(編碼RNA聚合酶)和RNA3(編碼MP),以及在3種RNA中排名第4的RNA4(編碼CP)。當然蘋果如何抵抗ApNMV的研究機制就更少了。陜西宣傳酵母文庫做什么酵母文庫質(zhì)粒使用指南酵母菌的介紹 。
酵母文庫篩選:為了系統(tǒng)地揭示調(diào)控叢枝菌根共生的轉(zhuǎn)錄因子,研究者以51個水稻基因的啟動子為誘餌,利用包含1570個水稻全長轉(zhuǎn)錄因子的文庫進行了酵母單雜交篩選。這51個基因主要是已報道的參與或調(diào)節(jié)菌根共生的基因。文庫篩選發(fā)現(xiàn)了一個由266個轉(zhuǎn)錄因子和47個啟動子高度連接的網(wǎng)絡(luò),稱之為"叢枝菌根共生酵母單雜交網(wǎng)絡(luò)(YAM)"。平均每個啟動子可以和4個轉(zhuǎn)錄因子互作。266個轉(zhuǎn)錄因子分屬至少11個轉(zhuǎn)錄因子家族。72%(192個)的YAM轉(zhuǎn)錄因子在根中存在表達(FPKM>1)。與非定殖根相比,19個YAM轉(zhuǎn)錄因子在叢枝菌根***定殖的根中表達上調(diào)。
本研究利用水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫篩選,繪制了水稻轉(zhuǎn)錄因子和菌根共生相關(guān)基因之間的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)受到保守的磷感應(yīng)途徑統(tǒng)一控制,以磷酸鹽饑餓響應(yīng)因子(PHR)為中心。PHRs 是菌根共生所必需的,通過 P1BS 順式作用元件調(diào)控菌根共生相關(guān)基因表達。高磷條件下,SPX蛋白抑制 OsPHR2 介導(dǎo)的對菌根共生相關(guān)基因表達的調(diào)控,進而抑制菌根共生。過表達 OsPHR2 可以部分拮抗磷介導(dǎo)的對菌根共生的抑制作用。本研究發(fā)現(xiàn),植物直接營養(yǎng)吸收和通過菌根共生的間接營養(yǎng)吸收,都受到相同的磷信號網(wǎng)絡(luò)統(tǒng)一調(diào)控。本研究將有助于高效用磷植株的培育。篩選酵母文庫選歐易生物技術(shù)可靠服務(wù)高效多年經(jīng)驗。
本研究通過酵母雙雜交篩選,鑒定到 CRY1 可以與 SWR1 復(fù)合物關(guān)鍵亞基 SWC6、ARP6 結(jié)合,共同以藍光依賴模式調(diào)控 H2A.Z 在染色質(zhì)的沉積。藍光***的 CRY1 可以增強 SWC6 與 ARP6 的相互作用。此外,HY5 也可以與 SWC6、ARP6 結(jié)合,將 SWR1 復(fù)合物募集到 HY5 靶向位置,調(diào)控 HY5 靶基因的表達,進而影響擬南芥下胚軸的伸長據(jù)此,本研究提出擬南芥光形態(tài)建成調(diào)控的分子機制:CRY1 通過增強 SWR1 復(fù)合物活性和 HY5 介導(dǎo) SWR1 復(fù)合物向 HY5 靶基因的募集,共同促進 H2A.Z 染色質(zhì)沉積,以調(diào)控 HY5 靶基因的表達和藍光條件下光形態(tài)建成。酵母文庫構(gòu)建的目的酵母的做法。廣東發(fā)展酵母文庫做什么
酵母單雜交/雙雜交文庫構(gòu)建簡述酵母雙雜交。陜西宣傳酵母文庫做什么
目前,歐易生物負責該水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫的維護和保存工作,并對廣大水稻科研工作者提供轉(zhuǎn)錄因子篩選服務(wù)。如去年歐易生物助力中國科學(xué)院分子植物科學(xué)***創(chuàng)新中心的王二濤老師應(yīng)用該文庫對水稻-叢枝菌根進行了深入研究,成功構(gòu)建了水稻-叢枝菌轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò),結(jié)果發(fā)表于《Cell》封面。截至文章發(fā)表,該文庫已收錄了1683個水稻轉(zhuǎn)錄因子,隸屬于54個家族,覆蓋預(yù)測的水稻轉(zhuǎn)錄因子總量的70%。文庫中水稻轉(zhuǎn)錄因子的a基因信息來源于PlantTFDB和KOME數(shù)據(jù)庫。文庫載體使用pGADT7,酵母菌株使用Y187,每一個轉(zhuǎn)錄因子菌株**保存于96孔板中。陜西宣傳酵母文庫做什么
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