單雜交篩選為了挖掘影響ALA誘導(dǎo)蘋果黃酮醇積累的關(guān)鍵性調(diào)控因子，作者以Y1HGold[proMdFLS1-AbAi] 為誘餌，通過酵母單雜交篩選了ALA處理后的蘋果愈傷組織cDNA文庫。結(jié)果顯示篩選出的蛋白質(zhì)主要參與光合作用調(diào)控、碳糖代謝、氧化/滲透脅迫響應(yīng)、***信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、木質(zhì)素生物合成、果實成熟發(fā)育等過程，以及一些功能未知的蛋白質(zhì)。其中， MdSCL8轉(zhuǎn)錄因子，由于其在草莓中的同源基因已被報導(dǎo)與黃酮的合成有關(guān)，引起了研究者的注意。進一步通過Y1H assay驗證確認了MdSCL8可以與MdFLS1啟動子互作（圖2A）。通過雙熒光素酶實驗和GUS檢測，發(fā)現(xiàn)MdSCL8可以負向調(diào)控MdFLS1啟動子活性（圖2B-D）。酵母雙雜交優(yōu)惠快速出報告品牌歐易生物特色科學(xué)嚴謹準確。湖北應(yīng)用酵母文庫

酵母雙雜交技術(shù)，自創(chuàng)建以來被廣泛應(yīng)用于蛋白互作研究領(lǐng)域，在生命科學(xué)的基礎(chǔ)探秘研究中起著重要作用。然而該技術(shù)設(shè)計初衷，*是斯坦利先生為了完成申請學(xué)校經(jīng)費的目的。該技術(shù)設(shè)計巧妙，它的許多優(yōu)點在設(shè)計之初并未顯現(xiàn)，反而在這么多年的高頻使用和進一步開發(fā)利用過程中越發(fā)明顯。（引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay：stillfindingconnectionsafter25years”）:(1）盡管酵母雜交技術(shù)揭示了蛋白質(zhì)結(jié)合位點的詳細信息，但操作簡單。只需2個質(zhì)粒+1個菌株即可完成，且有不同體系方便選擇。（2）該技術(shù)利用比較好的DNA結(jié)合位點，有效的***結(jié)構(gòu)域和友好的報告基因系統(tǒng)，可以放大弱互作的信號。（3）該技術(shù)可用于各種物種的蛋白互作檢測，具有物種普適性，尤其是人類蛋白。（4）衍生技術(shù)具有更***的應(yīng)用，可擴展到檢測蛋白質(zhì)與DNA、蛋白質(zhì)與RNA、蛋白質(zhì)與小分子以及其他組合之間的相互作用，甚至可實現(xiàn)將生理相互作用與表型數(shù)據(jù)直接關(guān)聯(lián)。當(dāng)然，做過酵母雜交實驗的小伙伴應(yīng)該都了解，互作結(jié)果的判斷，往往要等酵母生長好幾天才能看出來（當(dāng)然，小歐認為這在偉大的科研事業(yè)過程中算不上啥），互作強弱也是主觀判斷性較強，存在假陽性。北京發(fā)展酵母文庫酵母文庫雙雜交技術(shù)及應(yīng)用。

蘋果酵母文庫：黃酮醇是一類重要的次生代謝產(chǎn)物，在防治人類**、*******、****血脂、抗氧化、抗病毒、抗過敏等方面發(fā)揮著重要作用。蘋果除了含有多種維生素之外，還富含黃酮醇，這是"一日一蘋果，醫(yī)生遠離我"的重要原因。了解黃酮醇的生物合成調(diào)控對改善蘋果果實品質(zhì)、提高蘋果營養(yǎng)價值和提高蘋果環(huán)境適應(yīng)性具有重要意義。2022年2月，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)汪良駒團隊在國際期刊分子科學(xué)上發(fā)表了題為“MdSCL8asaNegativeRegulatorParticipatesinALA-InducedFLS1toPromoteFlavonolAccumulationinApples”的研究論文，該研究發(fā)現(xiàn)MdSCL8作為MdFLS1的新調(diào)節(jié)因子，在ALA誘導(dǎo)蘋果黃酮醇積累的過程中發(fā)揮負調(diào)控作用。該項目中所用的蘋果酵母文庫由歐易生物構(gòu)建。

歐易生物酵母文庫技術(shù)發(fā)表的又一篇高水平研究論文。植物***茉莉酸(JA)參與植物許多發(fā)育過程的調(diào)控。JAZ蛋白是茉莉酸信號反應(yīng)的阻遏物，通過抑制JA轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑來負向調(diào)節(jié)JA信號。花青素和原花青素是種子、葉、花和果實中重要的植物次生代謝產(chǎn)物，可充當(dāng)抗氧化劑，幫助***活性氧和對**老，對人類健康具有重要價值。已有研究表明，花青素和原花青素的生物合成基因的轉(zhuǎn)錄受MYB、basichelix-loop-helix(bHLH)及WD40蛋白的調(diào)控。其中，蘋果MYB轉(zhuǎn)錄因子MdMYB9參與調(diào)控JA介導(dǎo)的花青素和原花青素的生物合成，但其分子機制仍有待深入研究。眾所周知，酵母雜交技術(shù)存在一定的假陽性。

通過傳統(tǒng)的酵母雙雜交系統(tǒng)，以PtDAL1為誘餌，篩選樣本來源于不同年齡段的油松cDNA文庫。將獲得的陽性克隆，10個一組，挑選到1個96孔板的PCR板孔中，獲得10*96個陽性克隆的96孔板。以其中陽性克隆mix為模板，進行PCR擴增，并將所有的PCR產(chǎn)物進行純化。使用純化后的PCR產(chǎn)物，進行打斷后構(gòu)建二代測序文庫，通過NGS測序，獲得6G的陽性克隆數(shù)據(jù)。通過分析二代測序數(shù)據(jù)，獲得陽性克隆基因信息（去冗余后獲得135個互作子，包含21個TFs，2個TRs及酶類、熱激蛋白、RNA結(jié)合等蛋白，部分見表1）。挑選重要的候選基因進行一對一驗證（圖2）。與擬南芥中同源基因AGL6的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進行比對分析。對DAL1互作蛋白（DIPs）的基因表達譜、啟動子中的順勢作用元件功能進行分析，并對DIPs進行GO注釋（圖3）。綜合生信分析結(jié)果，構(gòu)建針葉樹老化途徑的調(diào)控模型（圖4）。酵母單雙雜交服務(wù)促銷季技術(shù)服務(wù)。吉林品質(zhì)酵母文庫做什么

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酵母單雜交篩選：（4）在篩選到的轉(zhuǎn)錄因子中，***GL1促進HIV-2轉(zhuǎn)錄。***GL1在免疫細胞中***表達，并與HIV的其他轉(zhuǎn)錄***因子，即Sp1、AP-1和PCAF/CBP/P300存在相互作用，本研究中顯示HEK293T細胞中，***GL1過表達后，與LTR連接的螢火素酶表達上升近2倍，說明***GL1是一個轉(zhuǎn)錄***因子。值得一提的是，文章的背景介紹內(nèi)容中，對應(yīng)用其他技術(shù)（如RNAi、scRNA-seq、CRISPR等）對HIV轉(zhuǎn)錄調(diào)控方向的已有成果分析，發(fā)現(xiàn)這些方法為HIV-1的復(fù)制和潛伏期提供了見解，但并沒有直接評估轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合和功能。文章中也對酵母單雜交技術(shù)與其他互作組技術(shù)（如Chip-seq、motif預(yù)測）進行了比較分析，發(fā)現(xiàn)eY1H技術(shù)對已識別因子的驗證率為30-60%，同等或優(yōu)于其他技術(shù)。湖北應(yīng)用酵母文庫

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