小歐從2018年即開始關(guān)注酵母雜交與高通量測序相結(jié)合的技術(shù)發(fā)展,如2017年CaoGang老師等發(fā)表的RLL-Y2H技術(shù),實現(xiàn)了文庫篩文庫可能,該技術(shù)通過對酵母雙雜常用載體的改造,并結(jié)合高通量測序,可直接獲得AD-BD互作蛋白對。所用方法相當巧妙,感興趣的同學(xué)請點擊《當酵母雙雜交遇到高通量測序》。鈕老師團隊之前的研究已經(jīng)鑒定了DAL1作為一種保守的針葉樹年齡生物標記基因,在油松從營養(yǎng)生長到生殖生長的時相轉(zhuǎn)變過程中起重要作用。為了進一步理解年齡效應(yīng)如何驅(qū)動針葉樹的發(fā)育,闡明與DAL1相關(guān)的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)很關(guān)鍵。鈕老師團隊利用傳統(tǒng)的Y2H篩選技術(shù)結(jié)合NGS測序技術(shù),優(yōu)化得到了Y2H-seq技術(shù),與傳統(tǒng)的篩選測序相比,大幅度節(jié)省了時間和實驗成本。為客戶提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)專業(yè)醫(yī)學(xué)課題標書論文一站式酵母雙雜交。安徽生物技術(shù)酵母文庫
酵母單雜交篩選:(4)在篩選到的轉(zhuǎn)錄因子中,***GL1促進HIV-2轉(zhuǎn)錄。***GL1在免疫細胞中***表達,并與HIV的其他轉(zhuǎn)錄***因子,即Sp1、AP-1和PCAF/CBP/P300存在相互作用,本研究中顯示HEK293T細胞中,***GL1過表達后,與LTR連接的螢火素酶表達上升近2倍,說明***GL1是一個轉(zhuǎn)錄***因子。值得一提的是,文章的背景介紹內(nèi)容中,對應(yīng)用其他技術(shù)(如RNAi、scRNA-seq、CRISPR等)對HIV轉(zhuǎn)錄調(diào)控方向的已有成果分析,發(fā)現(xiàn)這些方法為HIV-1的復(fù)制和潛伏期提供了見解,但并沒有直接評估轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合和功能。文章中也對酵母單雜交技術(shù)與其他互作組技術(shù)(如Chip-seq、motif預(yù)測)進行了比較分析,發(fā)現(xiàn)eY1H技術(shù)對已識別因子的驗證率為30-60%,同等或優(yōu)于其他技術(shù)。山西應(yīng)用酵母文庫酵母及其應(yīng)用ppt課件 酵母及其應(yīng)用 。
酵母文庫實驗:本研究報道了 OsNF-YB9 和 OsNF-YB7 在水稻中呈現(xiàn)亞功能化。OsNF-YB7 主要在胚中表達,而 OsNF-YB9 主要在發(fā)育中的胚乳中表達。在擬南芥 lec1-1 中異源表達 OsNF-YB9 或 OsNF-YB7 可以彌補 lec1-1 缺陷。OsNF-YB9 功能缺失導(dǎo)致種子發(fā)育異常,種子變長、變窄、變薄,堊白率較高。此外,osnf-yb9 中淀粉合成相關(guān)基因的表達紊亂。OsNF-YB9 可以與主要在水稻胚乳中表達的蔗糖合酶蛋白激酶 SPK 相互作用。spk 敲除突變體種子與 osnf-yb9 突變體種子都表現(xiàn)出堊白增加的表型。OsNF-YB9 在水稻和擬南芥中的異位表達導(dǎo)致了種子變小。綜上表明,OsNF-YB9 在水稻種子發(fā)育中起到關(guān)鍵調(diào)控作用。
通過酵母雙雜交進行篩選,結(jié)果顯示 SWC6 可以在藍光下與 CRY1 相互作用(圖 A-C)。同樣,酵母雙雜交實驗顯示 CRY2 也可以在藍光下與 SWC6 相互作用(圖 D)。并通過 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 實驗(圖 E-L)證實 CRY1、CRY2 與 SWC6 的結(jié)合是藍光依賴性的。SWC6 是真核生物中已報道的 SWR1 復(fù)合物亞基,負責(zé)催化 H2A.Z 在染色質(zhì)上的替換。已報道 SWR1 復(fù)合物中 SWC6 可以與 ARP6 亞基結(jié)合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 實驗(圖 A-H)顯示,CRY1、CRY2 可以藍光依賴性與 ARP6 結(jié)合。酵母生長速度快且容易操作的特點酵母文庫。
酵母文庫:2021年11月,山東農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝科學(xué)與工程學(xué)院張振魯團隊在MolecularPlantPathology(IF:5.663)發(fā)表了題為“Nitrate-inducibleMdBT2actsasarestrictionfactortolimitapplenecroticmosaicvirusgenomereplicationinMalusdomestica”的研究論文,報道了MdBT2蛋白在抑制病毒ApNMV基因組RNA復(fù)制中的作用。文章中所用酵母文庫為歐易生物構(gòu)建。ApNMV與ApMV相似,含有3種正義單鏈基因組RNAs:RNA1(編碼1a蛋白,后面你會經(jīng)??吹剿?,對病毒復(fù)制至關(guān)重要),RNA2(編碼RNA聚合酶)和RNA3(編碼MP),以及在3種RNA中排名第4的RNA4(編碼CP)。當然蘋果如何抵抗ApNMV的研究機制就更少了。2酵母展示質(zhì)量技術(shù)酵母展示技術(shù),共收錄30多個行業(yè),涵蓋多行業(yè)資料一鍵下載。山西應(yīng)用酵母文庫
文庫質(zhì)粒與酵母文庫載體重組。安徽生物技術(shù)酵母文庫
酵母雙雜交還可以這么用?Y2H-seq 揭示不老松年齡。***小歐又給大家?guī)砹艘黄湍鸽p雜交結(jié)合高通量測序技術(shù)的應(yīng)用文章。北京林業(yè)大學(xué)鈕世輝老師團隊,在傳統(tǒng)的酵母雙雜交技術(shù)流程基礎(chǔ)上,巧妙的結(jié)合了NGS技術(shù),優(yōu)化建立了Y2H-seq技術(shù),**縮短了常規(guī)的篩庫后測序驗證周期,節(jié)約了實驗成本。文章中應(yīng)用Y2H-seq技術(shù),對不老松年齡密碼進行了有趣的研究,其中所用酵母雙雜交文庫由歐易生物協(xié)助完成。眾所周知,酵母雙雜交技術(shù)是研究蛋白相互作用的利器。目前已知的蛋白質(zhì)相互作用至少有一半是通過酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)的。但是做過酵母雜交實驗的小伙伴也都知道蛋白篩選較容易,但是篩選后,想知道獲得的陽性克隆都對應(yīng)的是啥基因,所花費的人力物力相當不小。有困難解決困難,勇敢牛牛不怕困難。安徽生物技術(shù)酵母文庫
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