酵母雙雜交實驗表明，PtMADS11 與 PtDAL1 之間存在直接的相互作用（圖 C），并通過 BiFC、GST pull-down 得以證實（圖 D-E）。為進(jìn)一步研究在年齡信號調(diào)控中的作用機(jī)制，分別構(gòu)建了過表達(dá)PtDAL1和PtMADS11的擬南芥。與對照相比，過表達(dá)PtDAL1***提前了擬南芥的營養(yǎng)-生殖時相轉(zhuǎn)換（圖A），證實PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了關(guān)鍵作用。過表達(dá)PtMADS11植株在短日照下表現(xiàn)出早開花和花序結(jié)構(gòu)過早終止，表明PtMADS11在開花調(diào)節(jié)和花序內(nèi)分生組織命運(yùn)起到調(diào)控作用。在擬南芥中利用年齡調(diào)控通路不同節(jié)點關(guān)鍵基因突變體進(jìn)行功能互補(bǔ)實驗，結(jié)果顯示過表達(dá)PtDAL1可以恢復(fù)由于過表達(dá)miR156導(dǎo)致的開花延遲，但ft缺失會導(dǎo)致PtDAL1失活，PtDAL1過表達(dá)也不能恢復(fù)soc1-1-2突變體的表型，表明PtDAL1依賴或處于FT/SOC1的上游。而過表達(dá)PtMADS11可以恢復(fù)由過表達(dá)miR156或ft缺失導(dǎo)致的開花延遲，表明PtMADS11對開花的調(diào)控不依賴于miR156或FT。酵母文庫篩選方案可提供核體系和膜體系篩庫工作。山東酵母文庫

酵母單雜交結(jié)果顯示，磷酸鹽饑餓響應(yīng)因子OsPHR1/2/3可以***51個目標(biāo)啟動子中的25個，包括OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A等。OsRAM1、OsRAD1、OsWRI5A自身又可以調(diào)控許多菌根共生相關(guān)基因的表達(dá)（圖A）。對叢枝菌根共生響應(yīng)基因啟動子序列預(yù)測分析顯示，有78個轉(zhuǎn)錄因子被富集，87%的菌根共生響應(yīng)基因受到OsPHR1/2/3的調(diào)控，其中42%受到OsPHR1/2/3的直接調(diào)控。因此推測OsPHR1/2/3可能是菌根共生調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的一個關(guān)鍵調(diào)控樞紐（圖A-B）。EMSA和熒光素酶報告實驗證實，OsPHR12可以直接結(jié)合并***OsRAM1、OsWRI5A、OsPT11、OsAMT3啟動子序列（圖C-F），并且這種結(jié)合依賴于啟動子中的P1BS元件（圖G）。云南宣傳酵母文庫酵母文庫"酵母"和"文庫"有什么不同。

酵母雙雜交技術(shù)，自創(chuàng)建以來被廣泛應(yīng)用于蛋白互作研究領(lǐng)域，在生命科學(xué)的基礎(chǔ)探秘研究中起著重要作用。然而該技術(shù)設(shè)計初衷，*是斯坦利先生為了完成申請學(xué)校經(jīng)費(fèi)的目的。該技術(shù)設(shè)計巧妙，它的許多優(yōu)點在設(shè)計之初并未顯現(xiàn)，反而在這么多年的高頻使用和進(jìn)一步開發(fā)利用過程中越發(fā)明顯。（引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay：stillfindingconnectionsafter25years”）:(1）盡管酵母雜交技術(shù)揭示了蛋白質(zhì)結(jié)合位點的詳細(xì)信息，但操作簡單。只需2個質(zhì)粒+1個菌株即可完成，且有不同體系方便選擇。（2）該技術(shù)利用比較好的DNA結(jié)合位點，有效的***結(jié)構(gòu)域和友好的報告基因系統(tǒng)，可以放大弱互作的信號。（3）該技術(shù)可用于各種物種的蛋白互作檢測，具有物種普適性，尤其是人類蛋白。（4）衍生技術(shù)具有更***的應(yīng)用，可擴(kuò)展到檢測蛋白質(zhì)與DNA、蛋白質(zhì)與RNA、蛋白質(zhì)與小分子以及其他組合之間的相互作用，甚至可實現(xiàn)將生理相互作用與表型數(shù)據(jù)直接關(guān)聯(lián)。當(dāng)然，做過酵母雜交實驗的小伙伴應(yīng)該都了解，互作結(jié)果的判斷，往往要等酵母生長好幾天才能看出來（當(dāng)然，小歐認(rèn)為這在偉大的科研事業(yè)過程中算不上啥），互作強(qiáng)弱也是主觀判斷性較強(qiáng)，存在假陽性。

酵母單雜交測試：為驗證該文庫在Y2H和Y1H體系中的有效性，作者以O(shè)sMADS1為誘餌篩選水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫，進(jìn)行了酵母雙雜交測試。以Ghd7的啟動子片段為誘餌，進(jìn)行了酵母單雜交測試。結(jié)果顯示我們的水稻轉(zhuǎn)錄因子文庫可以有效且高通量的檢測蛋白-水稻TF、DNA-水稻TF間的相互作用。另外，該研究中指出，使用該文庫篩選鑒定蛋白-TF互作，采用mating法較為方便，即Y2HGold-Bait誘餌菌液與Y187-TF文庫菌液一對一雜交。而篩選鑒定DNA-TF互作，采用Y1HGold系統(tǒng)，即Y1HGold-pomoter篩選TF文庫質(zhì)粒更簡單高效。此外，可通過降低篩選壓力處理，進(jìn)行弱相互作用的檢測。關(guān)于酵母雜交文庫構(gòu)建及篩選你需要知道這些。

進(jìn)行了酵母雙雜交篩選實驗，結(jié)果顯示 MdMPK3 可以與 MdWRKY17 相互作用（圖 C），并且通過 BiFC、Co-IP 得以證實（圖 D-E）。MdMPK3 的激酶活性水平在炭疽菌***后也***上升（圖 B）。進(jìn)一步的 BiFC 和 Co-IP 表明，MdMEK4 可以與 MdMPK3 相互作用（圖 F-G）。體外激酶試驗表明，MdWRKY17 能夠被MdMEK4- MdMPK3 級聯(lián)磷酸化（圖 H）。綜上，MdMEK4-MdMPK3 級聯(lián)磷酸化 MdWRKY17。與對照相比，MdWRKY17過表達(dá)植株中水楊酸含量降低，而RNAiMdWRKY17植株中水楊酸含量升高（圖A）。眾所周知，酵母雜交技術(shù)存在一定的假陽性。重慶宣傳酵母文庫做什么

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酵母雙雜交文庫：植物從營養(yǎng)生長到生殖生長時相的不可逆轉(zhuǎn)變，是植物生命周期中的一個關(guān)鍵階段，是植物生存和繁殖至為關(guān)鍵的重要事件。在開始繁殖之前，許多多年生木本植物經(jīng)歷了一個相當(dāng)漫長的幼年時期。與模式植物（如擬南芥）相比，針葉樹通常具有非常長的生命周期。盡管在模式植物開花時間控制研究上取得相當(dāng)大的進(jìn)展，但對多年生樹木，特別是針葉樹年齡信號的調(diào)控機(jī)制仍知之甚少。因此，深入研究林木年齡信號對生殖發(fā)育過程的影響具有重要的理論和實踐意義。山東酵母文庫

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