通過酵母雙雜篩選實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步研究AaWRKY9蛋白功能，結(jié)果篩選到了與AaWRKY9互作的AaJAZ9蛋白，并通過Y2H、BiFC、CoIP等進(jìn)行了驗(yàn)證確認(rèn)。JAZs是JA介導(dǎo)的植物相應(yīng)中的負(fù)向調(diào)控因子，在毛狀體和老葉中高表達(dá)，在芽尖和嫩葉中表達(dá)量低。為確認(rèn)AaJAZ9是否抑制了AaWRKY9在促進(jìn)青蒿素積累過程中的轉(zhuǎn)錄***功能，通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)AaWRKY9與AaJAZ9共表達(dá)時，其轉(zhuǎn)錄活性被抑制，而使用MeJA處理后，這種抑制作用被抵消，且AaWRKY9轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)，反向驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。說明JA可以通過降解JAZ9，提高AaWRKY9轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)青蒿素生物合成。酵母單雜交/雙雜交文庫構(gòu)建簡述酵母雙雜交。天津生物技術(shù)酵母文庫

酵母雙雜交文庫：植物從營養(yǎng)生長到生殖生長時相的不可逆轉(zhuǎn)變，是植物生命周期中的一個關(guān)鍵階段，是植物生存和繁殖至為關(guān)鍵的重要事件。在開始繁殖之前，許多多年生木本植物經(jīng)歷了一個相當(dāng)漫長的幼年時期。與模式植物（如擬南芥）相比，針葉樹通常具有非常長的生命周期。盡管在模式植物開花時間控制研究上取得相當(dāng)大的進(jìn)展，但對多年生樹木，特別是針葉樹年齡信號的調(diào)控機(jī)制仍知之甚少。因此，深入研究林木年齡信號對生殖發(fā)育過程的影響具有重要的理論和實(shí)踐意義。河北建庫酵母文庫酵母單雜交文庫篩選選歐易生物技術(shù)可靠服務(wù)高效。

酵母雙雜交文庫：瘧疾是人類**古老的疾病之一，每年4月25日是世界防治瘧疾日，瘧疾目前仍是公眾健康所面臨的**嚴(yán)重威脅之一?；谇噍锼氐穆?lián)合處理法（ACTs）是WHO推薦的比較好處理方案。因發(fā)現(xiàn)具有抗瘧作用的青蒿素，挽救了數(shù)百萬人的生命，屠呦呦教授獲得了2015年諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎，從青蒿中分離出的青蒿素被推薦作為抗瘧疾的優(yōu)先藥物。之前研究表明，茉莉酸（JA）介導(dǎo)促成的青蒿素積累依賴于光，轉(zhuǎn)錄因子HY5也通過參與光信號調(diào)控促進(jìn)青蒿素合成。然而，光與JA相互作用機(jī)制及其對青蒿素生物合成調(diào)控的潛在機(jī)理仍未得到解決。

通過傳統(tǒng)的酵母雙雜交系統(tǒng)，以PtDAL1為誘餌，篩選樣本來源于不同年齡段的油松cDNA文庫。將獲得的陽性克隆，10個一組，挑選到1個96孔板的PCR板孔中，獲得10*96個陽性克隆的96孔板。以其中陽性克隆mix為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并將所有的PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。使用純化后的PCR產(chǎn)物，進(jìn)行打斷后構(gòu)建二代測序文庫，通過NGS測序，獲得6G的陽性克隆數(shù)據(jù)。通過分析二代測序數(shù)據(jù)，獲得陽性克隆基因信息（去冗余后獲得135個互作子，包含21個TFs，2個TRs及酶類、熱激蛋白、RNA結(jié)合等蛋白，部分見表1）。挑選重要的候選基因進(jìn)行一對一驗(yàn)證（圖2）。與擬南芥中同源基因AGL6的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行比對分析。對DAL1互作蛋白（DIPs）的基因表達(dá)譜、啟動子中的順勢作用元件功能進(jìn)行分析，并對DIPs進(jìn)行GO注釋（圖3）。綜合生信分析結(jié)果，構(gòu)建針葉樹老化途徑的調(diào)控模型（圖4）。酵母文庫構(gòu)建的目的酵母的做法。

酵母雙雜交篩選實(shí)驗(yàn)：為進(jìn)一步了解LEA3蛋白在干旱脅迫下調(diào)控植物生長和增強(qiáng)抗旱性的分子機(jī)制，本研究以干旱脅迫條件下的棉花根莖葉為材料，構(gòu)建了棉花干旱脅迫酵母文庫。并以GhLEA3為誘餌，采用酵母雙雜交篩選實(shí)驗(yàn)，從棉花酵母文庫中篩選獲得了GhLEA3互作蛋白，并對互作蛋白進(jìn)行了GO和KEGG分析，發(fā)現(xiàn)其中的互作蛋白GhVDAC1主要參與鈣信號通路和cGMP-PKG信號通路，互作蛋白Gh***A參與多種生物途徑，如糖原生成和代謝途徑。此外，GhVDAC1和Gh***A受干旱脅迫誘導(dǎo)表達(dá)***，且在GhLEA3敲除的棉株中表達(dá)量低于野生型棉株酵母文庫 技術(shù)服務(wù)歐易生物分子互作一站式服務(wù)。技術(shù)酵母文庫規(guī)格

酵母文庫文庫構(gòu)建篩選歐易生物。天津生物技術(shù)酵母文庫

本研究通過酵母雙雜交篩選，鑒定到 CRY1 可以與 SWR1 復(fù)合物關(guān)鍵亞基 SWC6、ARP6 結(jié)合，共同以藍(lán)光依賴模式調(diào)控 H2A.Z 在染色質(zhì)的沉積。藍(lán)光***的 CRY1 可以增強(qiáng) SWC6 與 ARP6 的相互作用。此外，HY5 也可以與 SWC6、ARP6 結(jié)合，將 SWR1 復(fù)合物募集到 HY5 靶向位置，調(diào)控 HY5 靶基因的表達(dá)，進(jìn)而影響擬南芥下胚軸的伸長據(jù)此，本研究提出擬南芥光形態(tài)建成調(diào)控的分子機(jī)制：CRY1 通過增強(qiáng) SWR1 復(fù)合物活性和 HY5 介導(dǎo) SWR1 復(fù)合物向 HY5 靶基因的募集，共同促進(jìn) H2A.Z 染色質(zhì)沉積，以調(diào)控 HY5 靶基因的表達(dá)和藍(lán)光條件下光形態(tài)建成。天津生物技術(shù)酵母文庫

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